Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11

• Автор: Фадеев, Федор Алексеевич
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 132 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Клеточные рецепторы энтеровирусов человека

1.1.1. Рецепторная специфичность полиовирусов

1.1.2. Рецепторная спегифичиость вирусов Коксаки А

1.1.3. Рецепторная специфичность вирусов Коксаки В.

1.1.4. Рецепторная специфичность вирусов

1.1.5. Рецепторная специфичность энтеровируса .

1.2. РОЛЬ КЛЕТОЧНЫХ РЕЦЕПТОРОВ В 1 ПРОНИКНОВЕНИИ ЭНТЕРОВИРУСОВ В КЛЕТКУ.

1.2.1. Механизм интернализации энтеровирусов.

1.2.2. Особенности прохождения стадии интернализации аффинными к энтеровирусами.
1.3. Заключение
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Вирусы
2.2. Первичная культура фибробластов эмбриона человека.
2.3. Перевиваемые клеточные культуры.
2.4. Адаптация вируса к новой клеточной культуре методом
НЕРАЗВЕДЕННЫХ ПАССАЖЕЙ.
2.5. Культивирование вируса в властных клетках, выделенных из крови больного острым миелоидным лейкозом.
2.6. Постановка реакции бляшкообразования и клонирование вируса.
2.7. Получение фотосенсибилизированного вируса.
2.8. Оценка гемагглютинирующей активности вируса.
2.9. Оценка инфекционной активности вируса
2 Оценка уровня адсорбции вируса 1 на клеточной мембране
2 Оценка скорости интернализации вируса.
2 Определение доли вирусных частиц, утрачивающих ипфекционмость после адсорбции на клетках.
2 Секвенирование генома вируса 1
2 Статистическая обработка результатов исследования.
ГЛАВА 3. КАРТИРОВАНИЕ МУТАЦИЙ, ПРИВОДЯЩИХ К ИЗМЕНЕНИЮ РЕЦЕПТОРНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ ВИРУСА ЕСН1
ГЛАВА 4. СЕЛЕКЦИЯ ВИРУСА НО ПРИЗНАКУ РЕЦЕПТОРНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ В ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЕ Л И В ВЛАСТНЫХ КЛЕТКАХ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ КРОВИ БОЛЬНОГО ОСТРЫМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ.
4.1. Селекция вируса 1 по признаку рецепторной специфичности при репродукции в клетках Л
4.2. Анализ механизма селекции мутантов вируса на клетках Л
4.3. Репродукция вируса 1 в властных клетках, выделенных от
БОЛЬНОГО ОСТРЫМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ.
ГЛАВА 5. ОСОБЕННОСТИ МЕХАНИЗМА АДАПТАЦИИ ВИРУСА ЕСНОИ К ПЕРЕВИВАЕМЫМ КЛЕТОЧНЫМ КУЛЬТУРАМ НЕР2 И .
5.1. Сравнение селективных свойств клеток Л иНЕр2 вотношении И ВАРИАНТОВ ВИРУСА
5.2. Свойства вируса 1, адаптированного к клеткам .
ОБСУЖДЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


IV межрегиональной научнопрактической конференции с международным участием ОГМА г. Омск, г. Межрегиональной научной конференции г. Томск, г. УрО РАН Вирусы и иммунитет г. Екатеринбург, г. III конференции молодых ученых России с международным участием Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины г. Москва, г. Актуальные вопросы вирусных инфекций в современный период г. Екатеринбург, г. По теме исследования опубликованы научные работы, из них 3 в рецензируемых журналах. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, главы литературного обзора, 3 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, включающего отечественных и 4 зарубежных источника, и приложений. Диссертация имеет объем 2 страницы, иллюстрирована таблицами и рисунками. Глава 1. Рецепторная специфичность является одним из ключевых параметров, определяющих чувствительность клеток к инфицированию энтсровирусами как i vi, так и i viv. В последние годы значительно возросло число работ, посвященных изучению взаимодействия энтеровирусов с клеточными рецепторами, а также механизма их проникновения в клетку. Появились новые данные об особенностях строения вирусных аитирецепторов, у некоторых энтеровирусов был изучен феномен внутритиновой изменчивости по признаку рецепторной специфичности. Адсорбция полиовируса V на клетках происходит в результате взаимодействия с первым доменом белка V 5, относящегося к надсемейству иммуноглобулинов 2, 3, 1, 7. Данный белок обладает аффинностью к витронектину, состоит из трех внеклеточных подобных доменов, трансмембранного домена и цитоплазменного Сконца , , , 9, 3. V экспрессируется на клетках многих органов и тканей эпителий тонкой кишки, легкие, сердце, печень, нейроны спинного мозга и синаптические бляшки скелетной мускулатуры 3. Однако, по данным . Это свидетельствует о том, что наличие рецептора V не всегда определяет чувствительность клетки к полиовирусу 3. Вместе с тем, данные об использовании полиовирусами корецепторов для инфицирования клетки в доступной литературе нами не обнаружены. До настоящего времени не выявлена возможность адаптации полиовирусов к какомулибо иному, кроме V, рецептору. В доступной литературе не содержится прямых указаний на тип рецептора, используемого адаптированным полиовирусом для инфицирования нейронов мыши, но, вероятно, им является мышиный гомолог V, V . Неоднократные попытки картировать мутацию, приводящую к изменению диапазона животныххозяев полиовируса, давали неодинаковые результаты для разных вирусных штаммов. У штаммов V1 и V1ОМ после адаптации к мышам была обнаружена аминокислотная замена I в белке V4 . Секвепирование двух других патогенных для мышей клонов V1 показало, что вирулентность первого клона определялась аминокислотной заменой I в белке V1, а второго клона в белке V2 4. Следует отметить, что выявленные локусы мутаций располагались в участках белков, образующих внутреннюю часть капсида 4, а также в белке V4, который не принимает участия в формировании вирусного антирецептора , . Авторы предлагают два возможных объяснения влияния этих мутаций на способность полиовируса к репродукции в нейронах мыши. Вопервых, мутации могли изменить форму вирусного антирсцептора, вследствие чего он приобрел высокую аффинность к V 4. Вовторых, обнаруженные мутации, могли облегчить экстернализацию V4 и конца V1 после взаимодействия вируса с рецептором. Как следствие, инициация процесса проникновения вирусной РЫК в клетку становилась возможной даже в результате низкоаффинного взаимодействия вирусного антирецептора с мышиным аналогом V Это предположение косвенно подтверждалось тем, что полученные мутанты обладали более высокой скоростью интернализации на клетках НЕр2, чем штамм V1 8. Таким образом, в настоящее время известен лишь один клеточный рецептор полиовирусов, V, что доказывает высокую консервативность рецепторной специфичности этой группы вирусов.