Молекулярно-биологические основы контроля вирусных гепатитов

• Автор: Кюрегян, Карен Каренович
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 347 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Геиатит В

1.1.1. Эпидемиология гепатита В.

1.1.2. Вирус гепатита В.

1.1.3. Диагностика гепатита В.

1.1.4. Скрытая ВГВинфекция.

1.1.5. Профилактика гепатита В

1.1.6. Терапия гепатита В.

1.2. Гепатит дельта.
1.2.1. Клинические особенности, диагностика и терапия гепатита
дельта
1.2.2. Вирус гепатита дельта
1.2.3. Эпидемиология гепатита дельта
1.3. Гепатит С
1.3.1. Эпидемиология гепатита С.
1.3.2. Вирус гепатита С.
1.3.3. Диагностика гепатита С.
1.3.4. Моделирование ВГСинфекции.
1.4. Гепатит А
1.4.1. Эпидемиология гепатита А.
1.4.2. Вирус гепатита А.
1.4.3. Профилактика инфицирования ВГА.
1.4.4. Надзор за циркуляцией вируса гепатита А с помощью методов
молекулярнобиологического анализа
1.5. Гепатит Е
1.5.1. Клинические особенности и диагностика гепатита Е.
Вирус гепатита Е.
Эпидемиология гепатита Е.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
Обследованные группы лиц.
Пациенты с хроническим гепатитом В.
Лица, относящиеся к группам повышенного риска
инфицирования ВГВ
Пациенты с хроническим гепатитом дельта
Пациенты с хроническим гепатитом С.
Пациенты с гепатитом А.
Пациенты с гепатитом Е.
Лица, относящиеся к условноздоровому населению РФ.
Образцы, полученные от животных
Образцы сывороток крови домашний уток
Образцы фекалий свиней.
Образцы воды.
Методы исследований
Сбор и преаналитическая обработка образцов.
Образцы сыворотки крови
Образцы биопсии печени.
Образцы фекалий
Хранение образцов и данных.
Серологические маркеры вирусных гепатитов
Выделение нуклеиновых кислот.
Выделение нуклеиновых кислот из образцов сыворотки крови Выделение нуклеиновых кислот из образцов фекальных
экстрактов
Выделение нуклеиновых кислот из образцов биопсии печени
Выделение нуклеиновых кислот из образцов воды
Молекулярные маркеры вирусных гепатитов
2.3.4.1. Выявление РНК ВГА.
2.3.4.2. Выявление ДНК ВГВ.
2.3.4.3. Выявление ДНК ВГВ уток
2.3.4.4. Выявление РНК .
2.3.4.5. Выявление РНК ВГС.
2.3.4.6. Определение генотипа ВГС.
2.3.4.7. Выявление РНК V
2.3.4.8. Выявление РНК ВГЕ.
2.3.5. Определение нуклеотидной последовательности ДНК
2.3.6. Анализ нуклеотидных последовательностей.
2.3.7. Создание химерных вирусоподобных частиц V
2.3.8. Моделирование инфекции V на игрунковых обезьянах .
2.3.9. Моделирование инфекции ВГВУ
2.3 Методы статистического анализа.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава 3. МОЛЕКУЛЯРНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОНТРОЛЯ
ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В.
3.1. Выявление ВГВинфекции.
3.1.1. Распространенность скрытой ВГВинфекции
3.1.2. Контроль чувствительности тестсистем для выявления
3.2. Терапия гепатита В.
3.2.1. Распространенность первичной лекарственной устойчивости
3.3. Контроль эффективности противовирусных препаратов,
направленных против ВГВ
3.3.1. Разработка системы оценки вируцидной активности
дезинфицирующих средств с помощью модели i viv инфекции вируса гепатита В уток
3.3.2. Оценка эффективности вирусной инактивации в препаратах плазмы крови донорской крови с помощью модели i viv инфекции вируса гепатита В уток.
Глава 4. МОЛЕКУЛЯРНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОНТРОЛЯ
ВИРУСНОГО ГЕНА ГИТА ДЕЛЬТА
4.1. Распространенность маркеров гепатита дельта среди условноздорового населения Российской Федерации
4.2. Анализ случаев хронического гепатита дельта в Республике
Глава 5. МОЛЕКУЛЯР1ЮБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОНТРОЛЯ
ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА С
5.1. Определение генотипа ВГС
5.2. Межгенотипическая рекомбинация ВГС.
5.3. Разработка суррогатной модели ВГСинфекции и оценка возможностей ее применения
Глава 6. МОЛЕКУЛЯРНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОНТРОЛЯ
ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА А
Глава 7. МОЛЕКУЛЯРНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОНТРОЛЯ
ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА Е
7.1. Частота выявления антител к вирусу гепатита Е среди условно
здорового населения.
7.2. Циркуляция вируса гепатита Е среди свиней в РФ.
7.3. Случаи спорадической и групповой заболеваемости ГЕ в РФ .
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАИЙ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Также, изза перекрывания открытых рамок считывания в геноме вируса, кодирующих и вирусную полимеразу, мутации в адетерминанте могут приводить к мутациям в полимеразе, что, в свою очередь, может влиять на репликативный потенциал вируса или приводить к развитию лекарственной устойчивости вируса. И наоборот, мутации в гене полимеразы, возникающие в вирусном геноме во время антивирусной терапии и приводящие к развитию лекарственной устойчивости, могут вызывать мутации в . Так, i с соавторами 1 было показано, что мутации в полимеразе ВГВ V4V приводят к появлению замен в 4I5, что сопровождается ослаблением связывания нейтрализующими антителами. Хотя снижение связывания было не полным, как это наблюдается для классической мутации вакцинного избегания 5, оно было значительным по сравнению с ВГВ дикого типа. Данные результаты были недавно подтверждены в клеточной культуре с соавторами 1. В1 В, избегающих нейтрализующего действия поствакцинальных антиНВэ, то есть представляющих угрозу для ранее вакцинированных против ГВ лиц. Различают 8 генотипов ВГВ, обозначаемых латинскими буквами А Н, которые в свою очередь разделяют на субгенотипы, обозначаемые цифрами А1, А2, В1 и т. Классификация ВГВ на генотипы основывается на степени различия нуклеотидной последовательности полного генома, превышающей 8, или 4,1 при анализе нуклеотидных последовательностей Бгена 2. На Рисунке 6 представлено географическое распространение генотипов ВГВ в мире. Рисунок 6. Географическое распространение генотипов ВГВ 6. Исследования по молекулярной эпидемиологии ВГВ показали, что генотип А вируса наиболее распространен в СевероЗападной Европе, Северной Америке и Африке. Генотипы В и С циркулируют в Азии. Генотип П является наиболее распространенным во всем мире, встречается на всех континентах, однако преобладает в Средиземноморском регионе, на Ближнем Востоке и в Индии. Генотип Е выявлен в Африке, генотип Г преимущественно в Новом Свете. Франции, а генотип Н в Центральной Америке, Мексике и США Калифорнии, и, как и генотип , считается генотипом аборигенного населения Америки 6. Несмотря на существование корреляции между генотипами и серотипами субтипами ВГВ, некоторые серотипы могут относиться более чем к одному генотипу, или наоборот, один субгенотип может кодировать несколько субтипов, как это показано, например, для субгенотипа , кодирующего субтипы серотипы vvЗ и ауу4 Тао, . На территории РФ преобладает генотип Э, реже встречаются генотипы А и С. Анализ нуклеотидных последовательностей ВГВ, выделенных в разных регионах РФ от пациентов с ГВ, показали, что доминирующим в РФ является субгенотип 1. Основным диагностическим маркером ГВ, появляющимся в сыворотке крови пациентов по окончании инкубационного периода месяцев с момента инфицирования, является НВзА. Утрата НВэАд обычно сочетается с появлением нейтрализующих антител антиНВэ. Наличие антиНВБ в сыворотке крови пациентов рассматривается либо как свидетельство проведенной вакцинации при отсугствин антител к другим белкам ВГВ, в первую очередь к капсидному белку, антиНВс, либо как следствие перенесенного ГВ при наличии антиНВс . Постоянное присутствие сывороточного в течение более 6 месяцев являются признаками хронизации инфекции Рисунок 7. Вероятность формирования хронического гепатита ХГВ зависит от возраста инфицирования. Помимо антиНВв в сыворотках крови инфицированных лиц обнаруживаются антитела к капсидному белку, представленные двумя классами антиНВс1М и антиНВсО Рисунок . Рисунок 7. Серологические профили течения острого А и хронического В гепатита В 0. АнтиI определяются в сыворотке крови пациентов в течение 8 месяцев и являются маркерами недавнего инфицирования, в то время, как антиI, как правило, сохраняются пожизненно 0. Еще одним белком, выявляемым в сыворотке крови пациентов в фазе активной репликации вируса, является II. Его функция в цикле вирусной репликации на настоящий момент не установлена. Исчезновение II из сыворотки крови пациентов обычно сопровождается появлением антиI, а также нормализацией уровня биохимических маркеров функции печени, однако в фазе реактивации ХГВ может происходить обратная сероконверсия с повторным появлением 3. Важнейшим маркером ГВ является вирусная ДНК.