Молекулярно-генетическая и биологическая характеристика вируса Батаи и создание тест-систем для диагностики этой инфекции

• Автор: Терехин, Сергей Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 86 с. : 9 ил.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Цвли и задачи исследова ия

Научная новизна рано.

Практическая значимость работы

Основные положения, выносимые па защиту

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Состав рода vi. Антигенная классификация. Таксономическое положение вируса Батаи в пределах сутертуппь Буньямвера.

1.2. Морфология и морфогенез ортобуньявирусов

1.3. Молекулярнобиологическая характеристика вирусов vi

1.4. Эпидемиолог ия лихорадки Батаи. Экология вирусавозбудителя.

1.4.1. История выделения вируса. Распространение.
1.4.2. Переносчики и позвоночные хозяева.
1.5. Взаимоотношение вируса Батаи с друг ими представителями рода vi.
1.6. Патогенность вируса для лабораторных животных.
1.7. Роль вируса Батаи в патологии человека
1.8. Специфическая диагностика лихорадки Батаи.
1.8.1. Вирусологическая диагностика
1.8.2. Серологическая диагностика
1.8.3. Молекулярная диагностика
1.9. Лечение и профилактика
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ
И. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 1. Материалы и методы
1.1. Вирусы
1.2. Получение антигенов.
1.3. Получение гипериммунных асцитных жидкостей
1.4. Сыворотки крови больных неясными лихорадочными заболеваниями и доноров
1.5. Сыворотки крови овец
1.6. Конъюгирование I с пероксидазой хрена.
1.7. Выделение I на протеин Асефарозе.
1.8. Метод флюоресцирующих антител.
1.9. Реакция бляшкообразования.
1 Иммуноферментиый анализ для выявления антигена.
1 Иммуноферментный анализ для выявления антител класса М и .
1 Реакция связывания комплемента.
1 Выделение РНК вируса Батаи.
1 Проведение ОТПЦР для выявления РНК вируса Батаи.
1 Анализ результатов ПЦР.
1 Секвестрование и филогенетический анализ.
III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
Глава 1. Филогенетический анализ ш таммов вируса Батаи,
ВЫДЕЛЕННЫХ В РОССИИ, НА УКРАИНЕ И В ЧЕХОСЛОВАКИИ.
1.1. Определение различий в антигенных детерминантах гликопротеина и полимеразы у штаммов вируса Батаи.
Глава 2. Разработка тестсистем ОТПЦР для выявления РНК вируса Батаи
2.1. Подбор праймеров, оптимизация условий проведения ПЦР
2.2. Определение специфичности разработанной тестсистемы ОТПЦР с использованием гетсрологичных вирусов
2.3. Определение чувствительности разработанной тестсистемы ОТПЦР
Глава 3. Разработка и характеристика тестсистем ИФА для выявления АНТИГЕНА ВИРУСА БАТАИ, М И I АНТИТЕЛ К ВИРУСУ БАТАН В СЫВОРОТКАХ КРОВИ ЛЮДЕЙ И СПЕЦИФИЧЕСКИХ I В СЫВОРОТКАХ ОВЕЦ
3.1. Принципы использованных модификаций метода ИФА
3.1.1. ИФА для определения антигенов вируса Батаи.
3.1.2. Непрямой метод сэндвичЙФА для определения специфических I
3.1.3. Метод захвата иммуноглобулинов класса М I. .
3.2. Получение антигенов.
3.3. Получение иммуноглобулинов и конъюгатов.
3.4. Выбор оптимальных рабочих разведений компонентов ИФА
3.5. Определение специфичности и чувствительности метода ИФА для выявления антигенов вируса Батаи.
3.6. Определение специфичности и чувствительности метода ИФА для выявления антител I и I к вирусу Батаи.
3.7. Серологическое обследование больных лихорадочными заболеваниями неясной этиологии и здоровых жителей Южного региона России на антитела к вирусу Батаи
3.8. Обследование сывороток крови овец из Астраханской области и Ставропольского края на I антитела к вирусу Батаи
Глава 4. Изучение противовирусной активности рибавирипа, его производных и других химиопрепаратов на репродукцию вируса Батаи
В ОПЫТАХ i vi
ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЛИТЕРАТУРА


Получение антигенов. Конъюгирование I с пероксидазой хрена. Выделение I на протеин Асефарозе. Метод флюоресцирующих антител. Реакция бляшкообразования. Иммуноферментиый анализ для выявления антигена. Иммуноферментный анализ для выявления антител класса М и . Реакция связывания комплемента. Выделение РНК вируса Батаи. Проведение ОТПЦР для выявления РНК вируса Батаи. Анализ результатов ПЦР. Секвестрование и филогенетический анализ. III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. Глава 1. ВЫДЕЛЕННЫХ В РОССИИ, НА УКРАИНЕ И В ЧЕХОСЛОВАКИИ. Определение различий в антигенных детерминантах гликопротеина и полимеразы у штаммов вируса Батаи. Глава 2. Глава 3. ИФА для определения антигенов вируса Батаи. Метод захвата иммуноглобулинов класса М I. Получение антигенов. Получение иммуноглобулинов и конъюгатов. Определение специфичности и чувствительности метода ИФА для выявления антигенов вируса Батаи. Определение специфичности и чувствительности метода ИФА для выявления антител I и I к вирусу Батаи. Глава 4. ЛИТЕРАТУРА. Арбовирусы это экологическая группа вирусов, передающихся восприимчивым позвоночным через укусы кровососущих членистоногих комаров, клещей, москитов, мошек и мокрецов. К этой группе тесно примыкают зоонозные вирусы, циркулирующие среди позвоночных животных, без участия кровососущих членистоногих. К ним относятся, в частности, возбудители ряда геморрагических лихорадок , Марбург, Эбола, аргентинская, боливийская, венесуэльская, бразильская, ККГЛ, с почечным и лгочным синдромом. Общее число вирусов, относящихся к этим категориям, составляет примерно 0. Ио крайней мере, для 0 из них выявлена способность вызывать заболевания людей
Такие арбовирусные инфекции, как лихорадка денге, геморрагическая лихорадка денге, жлтая, лихорадка, восточный, западный, венесуэльский энцефаломиелиты лошадей, энцефалиты японский, клещевой, СентЛуис, долины Муррея, Росио, Западного Нила, калифорнийский, лихорадки долины Рифт, москитные лихорадки, карельская лихорадка идругие далеко не полный перечень опасных для человека арбовирусных инфекций, представляющих огромное значение для здравоохранения в эндемичных регионах мира. Борьба, а часто и этиологическая расшифровка вспышек арбовирусных инфекций затрудняются огромным антигенным разнообразием возбудителей, массивностью эпидемических вспышек с охватом в короткий срок значительных групп населения, необходимостью лабораторного подтверждения диагноза, отсутствием специфических средств лечения, а нередко и профилактики. На территории бывшего СССР выявлено арбовирусов, относящихся к семействам vii, vivii, ivii, vii, Iivii, ivii, xvii. Многие из них известны как возбудители заболеваний человека. Для других патогенность для человека пока не выявлена, что отнюдь не означает отсутствия их потенциальной опасности. Значительная часть из известных арбовирусных инфекций включая лихорадку Батаи относится к категории малоизученных. Вирус Батаи принадлежит к семейству Випуачтс1ае, роду ОгВюЪипуачЬт который насчитывает более 0 вирусов и антигенному комплексу Буньямвера, включающего не менее представителей. Ареал вируса Батаи охватывает южные, юговосточные и восточные регионы Азии, Западную, Центральную и Восточную Европу, Африку Судан, Уганда 2. Установлена циркуляция этого вируса в разных ландшафтных зонах Европейской и Азиатской территорий России 2, . Батаи на эндемичных территориях выраженной патогенностью для человека ограниченностью данных о его роли в патологии человека и животных отсутствием диагностических тестсистсм, доступных для использования в практических лабораториях и этиотропных средств лечения лихорадки Батаи отсутствием достаточной информации по молекулярногенетической и антигенной идентификации штаммов вируса Батаи и близкородственных вирусов, которая имеет прямое отношение к пониманию процессов эволюции рода ОмЪоЬипусп1гш. Батаи, создание комплексной системы специфической диагностики лихорадки Батаи, определение активности ряда коммерческих и экспериментальных химических соединений в отношении этого патогенного агента.