Регуляция экспрессии специфических белков печени и транскрипционных факторов в гепатокарциномах мышей

• Автор: Черемнова, Оксана Александровна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 136 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
Список сокращений
Введение
Глава 1. Обзор литературы Ю
Краткий обзор семейств гепатоцитарных ядерных факторов. ] ()
Семейство С/ЕВР.
Семейство HNF1
Семейство HNF3
Семейство HNF6
Семейство HNF4
Супер-семейство ядерных рецепторов
Развитие печени
Семейство GATA
Развитие поджелудочной железы
Обобщение сведений о локализации и влиянии ГЯФ на гепато-специфическую экспрессию.
Обеспечение гепатоцитарного фенотипа - взаимная регуляция ГЯФ.
HNF4 - один из важнейших ГЯФ
Роль ГЯФ при регенерации и вирусной инфекции
Нарушения экспрессии ГЯФ
Гепатоцеллюлярные карциномы
ГЯФ при канцерогенезе
Заключение
Экспериментальная часть
Глава 2. Материалы и методы
Список использованных растворов и сред.
Линии перевиваемых гепатокарцином
Клеточные линии.
Бактериальные штаммы и плазмидные векторы.
Трансформация клеток E. Coli.

Выделение нуклеиновых кислот
Электрофорез нуклеиновых кислот
Метод “Обратная Транскрипция - Полимеразная Цепная Реакция” (ОТ-ПЦР) 64 Метод TRAP (Telomerese Repeate Amplification Protocol)
Авторадиография
Иммунохимическое выявление белков
Сканирование и компьютерная обработка результатов.
Глава 3. Результаты исследований
Описание исследуемой модели гепатокарцином мышей
Восстановление экспрессии гена HNF4a в культуре клеток НЗЗ
Анализ коллекции перевиваемых гепатокарцином мышей
Глава 4. Обсуждение полученных результатов
Экспрессия HNF4a коррелирует с уровнем дифференцировки гепатокарцином. 97 Изменение экспрессии ГЯФ и некоторых транскрипционных факторов при
прогрессии ГК мышей.
Снижение уровня дифференцировки при прогрессии ГК мышей.
Утрата эпителиальных свойств при прогрессии ГК мышей Ю
Индукция активности гена с-тус и активация теломеразного комплекса.
Восстановление экспрессии гена HNF4a
Восстановление некоторых эпителиальных свойств. ]
Восстановление экспрессии гепато-специфических транскрипционных 1Ю
регуляторов.
Выводы
Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АФП - альфа-фетопротеин al-AT - al-антитрипсин ДСД - ДНК-связывающий домен ГК -гепатоцеллюлярная карцинома 6ГК - быстрорастущая ГК
бнГК - быстрорастущая низко-дифференцированная ГК мГК - медленнорастущая ГК
мвГК - медленнорастущая высоко-дифференцированная ГК
ГЯФ (HNF) - гепатоцитарные ядерные факторы
ЛСД - лиганд-связывающий домен
СА - сывороточный альбумин
ТТР - транстиретин
ТФН - трансферрин
ФБ - фибриноген
Аро - аполипопротеин
СВР - цАМФ-респонсивный связывающий белок
COUP-TF - chick ovalbumin upstream transcription factor
ER - эстрогеновые рецепторы
FGF - фактор роста фибробластов
FTF - транскрипционный фактор альфа-фетопротеина
GR - глюкокортикоидные рецепторы
HBV - вирус гепатита В
HCV - вирус гепатита С
HGF - фактор роста гепатоцитов
L-PK - 1-пируват киназа
MR - минералокортикоидные рецепторы
ODC - орнитин декарбоксиксилаза
РЕРСК - фосфоенолпируват-карбоксикиназа
RAR - рецепторы транс-ретиноевой кислоты
RXR - рецепторы 9-цис-ретиноевой кислоты
ТАТ - тирозин-аминотрансфераза
TERT - обратная транскиптаза теломеразы
TGF - фактор роста опухоли
TNF - фактор некрозов опухоли
Эпителий тонкого кишечника экспрессирует гомеобоксные факторы Cdxl и Hoxel 1, которые вместе с ГЯФ определяют экспрессию генов, специфичных именно для этой ткани (Locker, 2001).
Для формирования печени в раннем эмбриогенезе важны энтодермальные факторы семейства GATA и гепатоцитарные ядерные факторы vHNFI. HNF3ß и HNF4a. Инактивация любого из этих генов приводит к эмбриональной летальности на ранних стадиях: инактивация генов GATA6 и vFTNFl подавляет экспрессию гена HNF4a (Morrisey et al., 1998). Таким образом, на стадии раннего эмбрионального развития факторы GATA6 и vHNFI находятся на иерархической лестнице выше, чем HNF4ct.
Инактивация vHNFI не затрагивает экспрессию HNF3a (Coffinier et al., 1999), a инактивация GATA6 подавляет экспрессию HNF3a не полностью (Morrisey et al, 1998). Инактивация HNF3ß приводит к тому, что в эмбриоидных тельцах снижена экспрессия HNF4a и HNF1, а мРНК HNF3a отсутствует (Duncan et al., 1998).
1.5. Обобщение сведений о локализации и влиянии ГЯФ на гепато- . специфическую экспрессию.
В таблице 1 приведены сведения о некоторых наиболее полно охарактеризованных печень-специфических генах и факторах, осуществляющих регуляцию их экспрессии.
В таблице представлены гены сывороточных белков СА, АФП, ТТР и АроВ. Высокий уровень транскрипции этих генов в основном постоянный и регулируется комбинаторным действием промоторов и энхансеров. В печени синтезируется множество ферментов - регуляторов метаболизма (Lemaigre and Rousseau, 1994). Глюкагон, инсулин и другие гормоны регулируют уровень транскрипции фосфоенолпируват карбоксилазы (РЕРСК).
Из приведенной таблицы видно, что регуляторные элементы печень-специфических генов содержат большое число сайтов связывания для ГЯФ.
На рисунке 2 приведены общие сведения о локализации ГЯФ в организме мыши. Видно, что ГЯФ экспрессируются в разных органах и тканях, но необходимо четко отметить, что только в печени можно наблюдать экспрессию всех известных ГЯФ. Направление и уровень дифференцировки печени однозначным образом формируется совокупным действием ГЯФ. Экспрессия ГЯФ в печени взаиморегулируется, однако, связи чрезвычайно сложны.