Разработка твердофазного иммуноферментного анализа для прямого обнаружения антигенов вируса классической чумы свиней

• Автор: Васильев, Александр Павлович
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 122 с. : ил.

Несмотря на многолетние усилия, прилагаемые для ликвидации классической чумы свиней КЧС, болезнь продолжает представлять серьезную угрозу свиноводству во всем мире. Благоприятная эпизоотическая ситуация в России, значительное сокращение числа вспышек классической чумы свиней, 9 в г. КЧС, однако угроза спорадических вспышек болезни, в том числе в крупных свинокомплексах, постоянно существует. Различные формы течения болезни, циркуляция вируса различной патогенности на фоне вакцинированного поголовья свиней, вторичные инфекции приводят к многообразию клинических симптомов, патологоанатомических изменений, что затрудняет постановку точного диагноза на классическую чуму свиней и оценку истинной эпизоотической ситуации 9. Для проведения лабораторных исследований на КЧС применяется метод выделения вируса в культуре клеток с последующей идентификацией иммунофлуоресценцией, который в настоящее время считается эталонным I, , но его использование возможно только в хорошо оснащенных, вирусологических лабораториях или научных учреждениях 3, 7, 8. В ведущих лабораториях Европейского Союза и США для обнаружения антигена вируса КЧС разработаны несколько вариантов иммуноферментного анализа под разными коммерческими названиями i VI . I , Швейцария, V , IXX, США, I V IX, Франция, однако сведения об их диагностической оценке ограничены. В России были выполнены работы по разработке метода прямого обнаружения специфического антигена вируса, основанного на ингибиции рекомбинантного белка Е2 непрямым жидкофазным блокирующим вариантом ИФА Бъядовская О. П. и соавт. Таким образом, в связи с очевидной необходимостью решения проблемы мониторинга и ликвидации болезни на территории России, необходим дополнительный, доступный и чувствительный метод прямого обнаружения антигена вируса КЧС в патологическом материале для использования в региональных лабораториях и, особенно, при вспышках КЧС в промышленных свинокомплексах. Цель и задачи исследований. Основной целью исследований являлась разработка твердофазного иммуноферментного анализа на основе моноклональных антител для прямого обнаружения антигенов вируса КЧС в органах и тканях зараженных свиней. ТФ ИФА при исследовании патологического материала от экспериментально заражнных вирусом классической чумы свиней и при вспышках болезни в свинокомплексах. Научная новизна. Получено 9 клонов гибридных клеток, стабильно секретирующие моноклональные антитела, специфичные к антигенным детерминантам основного структурного полипептида Е2 вируса КЧС. На основе сэндвич ТФ ИФА усовершенствован способ отбора моноклональных антител для использования в качестве улавливающих и детектирующих структурный полипептид Е2 вируса КЧС. Разработан метод двухсайтового ТФ ИФА для прямого обнаружения антигена вируса КЧС в лейкоцитах крови инфицированных вирусом КЧС свиней, пригодный для лабораторной диагностики и мониторинга болезни. Практическая значимость и реализация результатов исследований. На основании результатов апробации в экспериментальных условиях, проведении экспертизы полевого патологического материала и комиссионных испытаний разработанный метод двухсайтового ТФ ИФА рекомендован для лабораторной диагностики КЧС и мониторинга болезни в свинокомплексах. Пригодность разработанного твердофазного иммуноферментного анализа для прямого обнаружения антигенов вируса классической чумы свиней подтверждена комиссионными испытаниями и при проведении диагностических исследований на классическую чуму свиней в ГНУ ВНИИВВиМ. Апробация работы. Результаты исследований, выполненных по теме диссертации, доложены и обсуждены на заседаниях учного совета ГНУ ВНИИВВиМ в г. Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов г. Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ. Е2 вируса, как основа разработки метода двухсайтового твердофазного иммуноферментного анализа для прямого обнаружения вируса КЧС. ТФ ИФА, результаты его апробации при исследовании патологического материала от экспериментально заражнных животных и в лабораторной диагностике КЧС. Основной объм исследований проведн автором самостоятельно. Изучение иммунохимических характеристик моноклональных антител проводились совместно с к.