Создание синтетических антигенов для лабораторной диагностики губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота и классической чумы свиней

• Автор: Решетников, Геннадий Геннадьевич
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 146 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ стр.

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Характеристика вируса КЧС

2.1.1. Классификация, морфология и физикохимические свойства вируса КЧС

2.1.2. Организация генома вируса КЧС и антигенные свойства кодируемых структурных белков

2.1.3.Биологические свойства вируса КЧС

2.2. Характеристика возбудителя ГЭ КРС

2.2.1. Структура прионного белка

2.2.2. Свойства прионного белка

2.2.3. Диагностика прионных болезней

2.3. Получение пептидов и использование созданных на их основе синтетических антигенов в диагностике инфекционных заболеваний животных и человека
2.3.1. Методы теоретического поиска иммунодоминантных участков белков
2.3.2. Краткое описание методов синтеза пептидов
2.3.3. Получение искусственных антигенов на основе синтетических пептидов для диагностики инфекционных заболеваний животных и человека
2.4. Заключение по литературному обзору
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы и методы
3.1.1. Материалы, оборудование и реагенты
3.1.2. Методы исследования
3.2. Результаты собственных исследований
3.2.1. Компьютерный анализ аминокислотной последовательности белка Е2 вируса КЧС штамма ЛК ВНИИВВиМ
3.2.2. Компьютерный анализ аминокислотной последовательности прионного белка КРС
3.2.3. Твердофазный синтез пептидов фрагментов белка Е2 вируса КЧС и прионного белка КРС
3.2.3.1. Синтез пептидов ВосВг методом
3.2.3.2. Синтез пептидов РтосВи1 методом
3.2.4. Результаты аминокислотного анализа синтетических фрагментов белка Е2 вируса КЧС и прионного белка КРС
3.2.5. Смеси, созданные на основе пептидов, и МАРконструкция
3.2.6. Антигенные свойства свободных пептидов фрагментов белка Е2 вируса КЧС и их смесей.
Иммуногенные свойства конъюгатов пептидов с белкаминосителями, смесей и МАРконструкции
3.2.7. Изучение возможности использования синтетических пептидов и смесей, созданных на их основе, для выявления антител к вирусу КЧС
3.2.8. Изучение иммуногенных свойств пептидов фрагментов прионного белка КРС и смесей, созданных на их основе
3.2.9. Изучение возможности использования антител против синтетических фрагментов прионного белка КРС для выявления возбудителя ГЭ КРС иммуногистохимическим методом
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Разработаны и реализованы схемы синтеза индивидуальных пептидов фрагментов белка Е2 вируса КЧС и прионного белка КРС с использованием ВосВг и РтосВШ методов. Разработаны Методические указания по использованию синтетических антигенов для обнаружения антител к вирусу классической чумы свиней методом непрямого иммуноферментного анализа, которые утверждены директором института г. Разработаны Методические указания по использованию синтетических антигенов для обнаружения антител к вирусу классической чумы свиней в реакции непрямой гемагглютинации РИГА, которые утверждены директором института г. С использованием вышеуказанных методик проведено исследование 8 проб сыворотки крови свиней из различных свиноводческих хозяйств Российской Федерации. Разработаны Методические указания по применению смеси антител к фрагментам прионного белка для лабораторной диагностики губкообразной энцефалопатии КРС иммуногистохимическим методом, которые утверждены директором института г. С использованием разработанной методики исследовано препаратов, представляющих собой срезы головного мозга КРС. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ. КРС. Е2 вируса КЧС, созданных на их основе смесей и конъюгатов с белкаминосителями. КЧС в непрямом варианте ИФА и РИГА. Результаты испытаний Методических указаний по применению смеси антител к фрагментам прионного белка для лабораторной диагностики губкообразной энцефалопатии КРС иммуногистохимическим методом. Апробация результатов работы. Результаты исследований по теме диссертации представлены и обсуждены на заседаниях ученого совета ФГУ ВНИИЗЖ и на следующих научных конференциях в период гг. Проблемы инфекционной патологии сельскохозяйственных животных Владимир, г. Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов Щелково, г. Актуальные проблемы патологии свиней, крупного и мелкого рогатого скота Владимир, г. Международной научной конференции Актуальные проблемы инфекционной патологии животных Владимир, г. Объем и структура работы. Исследования по диссертационной работе выполнены в г. ФГУ Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ ВНИИЗЖ, г. Владимир. Диссертация изложена на 6 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы, содержащего 7 источников, из них 2 зарубежных авторов, и приложения. Работа иллюстрирована рисунками и содержит таблиц. Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам лабораторий Малоизученных болезней, Болезней свиней, Диагностики особо опасных болезней животных и Диагностики болезней КРС и свиней за оказанную помощь в проведении отдельных этапов работы и их обсухщение. Первоначально вирус КЧС был отнесен к сем. РевМгиБ, так как он имел нуклеокапсид с икосаэдрическим типом симметрии, оболочку и однонитиевую РНК. Однако развитие молекулярнобиологических методов исследований позволило получить новые данные о стратегии репликации вируса КЧС в клетках и организации его генома. В году была предложена новая классификация согласно которой вирус КЧС, вместе с вирусом диареи КРС и вирусом пограничной болезни овец, стал относится к сем. РЫмпбае в рамках того же рода Реэймгив 9. Вирионы пестивирусов представляют собой сферические частицы диаметром нм с икосаэдрическим типом симметрии. Они состоят из нуклеокапсида размером нм и оболочки, содержащей липиды , . Коэффициент седиментации составляет 8 в, плавучая плотность 1,1, гсм3. Вирус чувствителен к температурному фактору при температуре С инактивируется через минут, при 0С моментально, при температуре С теряет инфекционность в течение 2х недель. Вирус, содержащийся в образцах сыворотки крови животных, сохранял свою активность в течение 6 месяцев при температуре 2 4С , , . Ультрафиолетовый свет с длиной волны 4 нм инактивирует культуральный вирус через 5 минут. Дезинфецирующими веществами являются 2 3 раствор , формальдегид 2,5, хлорная известь в соотношении с водой 1, 3 6 крезоловое мыло.