Получение и изучение квадром на модели гибридом к вирусу гриппа и пероксидазе

• Автор: Волохов, Дмитрий Викторович
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 147 с. : ил.

Получены и охарактеризованы два клона квадром, продуцирующих бисайгспецифические моноююнальные антитела к нуюгеюпротеаду вируса гриппа А птиц и пероксидазе из корней хрена На основе этих моноклональных антител разработан непрямой твердофазный вариант энзимного иммуноанализа нуклеопротеида вируса гриппа, который может служить потенциальной моделью иммуноферментного метода обнаружения вирусных белков с помощью бисайтспецифических моноклональных иммуноглобулинов. Все полученные в ходе работы моноююнальные иммуноглобулины к пероксидазе из корней хрена, секретируемые гибридомами, демонстрируют избирательную антигенную специфичность. Они взаимодействуют только с группой катионных изоэнзимов пероксадазы, связываясь как с линейными, так и конформационно зависимыми эпитопами. Некоторые из полученных антител способны частично ингибировать каталитическую активность фермента в жидкой фазе. При проведении экспериментов по изоляции и характеристике маркированных субклонов гибридом, дефектных по генам, кодирующим ферменты тимидинкиназу ТКГ варианты и гипоксаншнгуанозинфосфорибозишрансферазу ГГФРТварианты установлено следующее. В клонах гибридом высока инцидентность частота 3 5 клеток, экспрессирующих 8фенотип. В процессе ступенчатой селэшии исходных родительских клеток гибридом по системе ii . НАТ6 клеток накапливаются клеткимутанты, экспрессирующие кодефектный по обоим ферментам фенотип частота вне зависимости от того, какой из токсических аналогов нуклеотидов используется для этой селекции на начальном этапе. Результаты конструирования клеток квадром, секретирующих бисайтспецифические моноклональные анштега к нуклеопротеаду вируса гриппа птиц типа А и пероксидазе из корней хрена, показали следующее. Клетки квадром одновременно продуцируют конвенциональные моноспецифические и гибридные бисайтспецифические молекулы иммуноглобулинов. Сравнение свойств и эффективности применения модельной тестсистемы на основе бисайтспецифических моноклональных иммуноглобулинов для обнаружения нуклеопротеида вируса гриппа птиц шла А в биологических образцах с тестсистемой на основе моноспеиифических МКА показало следующее. Модельная тестсистема энзимного иммуноанализа на основе бисайтспецифических МКА лишена недостатков классических вариантов ИФА и имеет следующие преимущества по сравнению с последними. Апробация результатов работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Международной научнопрактической конференции, посвященной летию ВНИИВВиМ Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзотическими болезнями животных 9 декабря, г. Ученого Совета ВНИИВВиМ апреля г. ВНИИВВиМ и на межлэбораторном совещании сотрудников ВНИИВВиМ 7 сентября, . Публикация результатов исследований. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 0 листах машинописного текста по общепринятой схеме и включает, введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы 3 источника, в том числе отечественные. Отдельные фрагменты экспериментальных работ выполнены совместно со следующими сотрудниками ВНИИВВиМ кандидатом ветеринарных наук научным сотрудником ИМ Сургучовой работа со штаммами вируса гриппа А птиц и разработка иммуноанализа нуклеопротеида этого вируса, кандидатом биологических наук, старшим научным сотрудником Б. В. Новиковым хроматографические исследования и иммуноанализ, кандидатом биологических наук научным сотрудником ЕГ. Анохиной электрофоретический анализ и иммуноблоттинг белков. Научным сотрудником НИИ Канцерогенеза РАМН г. Москва Ю. Д Сорокиной работы по культивированию клеток гибрвдом и квадром i viv. За оказанную ими методическую и консультативную помощь автор выражает им искреннюю благодарность. Бисайтспецифические иммуноглобулины и гибридомные гибридомы I. МКА желаемой специфичности 6. Появление МКА ознаменовало начало нового этапа в методологии иммунологических исследований Это привело к бурному росту и научному прогрессу в детализации антигенной структуры, анализу эпитопного дизайна, картированию антигенных детерминант макро и микроорганизмов ,,6,8,6,4,2,0. Таблица 1. Наименование метода Методическим прием Наименование продуцента i г. Т7. Бясаяжстщяфлческж пмтуяоглоЬуотяы ж гпЬрмдомяые гжЬрждояы.