Антивирусная активность новой лекарственной формы интерферона для местного применения

• Автор: Выжлова, Евгения Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 155 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Вирусы простого герпеса, аденовирусы и вирусы гриппа как возбудители социально значимых инфекционных заболеваний

1.1.1 Вирус простого герпеса.

1.1.2 Аденовирусы.,

1.1.3 Вирусы гриппа

1.2 Интерфероны первого типа и их роль в функционировании иммунной системы человека и патогенезе герпетической, аденовирусной и гриппозной инфекции.

1.3 Система ПОЛАОЗ и е роль в патогенезе вирусных инфекций.

1.4 Модели д1я оценки противогерпетической, противоаденовирусной и противогриппозной эффективности лекарственных средств i vi и i viv.

1.5 Методы оценки биологической активности интерферона.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1 Вирусы.
2.2 Клеточные культуры.
2.3 Определение цитотоксического действия веществ
2.4 Определение цитопатической дозы вируса.
2.4.1 Определение тканевой цитопатической дозы вируса ТЦИД.
2.4.2 Определение цитопатической дозы вируса методом бляшкообразования.
2.5 Определение специфической противовирусной активности интерферона.
2.6 Определение противогерпетической активности соединений i vi
2.6.1 Определение антигерпесвирусного действия вещества путем оценки его способности предотвращать вирусиндуцированное цитопатическос действие ЦПД в культуре клеток
2.6.2 Определение антигерпесвирусного действия вещества путем оценки снижения инфекционного титра вируса.
2.7 Определение противогерпетической активности комбинации соединений i vi
2.8 Определение противоаденовирусной активности соединений i vi
2.9. Определение противогриппозной активности соединений i vi
2.9.1 Определение противщриппозной активности соединений i vi, визуальный учет цитопатического действия вируса
2.9.2 Определение противогриппозной активности соединений i vi, учет цитопатического действия вируса с использованием автоматического спектрофотометра.
2. Физикохимические методы анализа.
Определение плотности растворов прозрачных жидкостей.
Определение вязкости жидкостей.
Определение жидкостей
2. Препараты
. Препараты для разработки новой лекарственной формы
Противогерпетичсские химиопрспараты
Препараты, активные в отношении вируса гриппа
2. Животные.
2. Стандарты
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА НОВОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ИНТЕРФЕРОНА. ДЛЯ МЕСТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ.
3.1 Изучение свойств различных марок полимерной основы
3.2 Подбор антиоксидантов для новой лекарственной формы.
3.3 Определение тканевой цитотоксичсской концентрации ТЦ исследуемых веществ.
3.4 Исследование влияния полимера на специфическую противовирусную активность интерферона.
3.5 Подбор концентраций альбумина для обеспечения стабильности человеческого рекомбинантного интерферона альфа2 в процессе хранения.
3.6 Подбор вспомогательных веществ для новой лекарственной формы с учетом возможности изучения i vi с использованием культуры клеток
3.7 Изучение влияния антиоксидантов на специфическую противовирусную активность интерферона.
3.8 Изотонирование растворов
ГЛАВА 4. АНТИВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ НОВОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО РЕКОМБИНАНТНОГО АЛЬФА2.
4.1 Краткая характеристика свсжевыдсленных штаммов ВПГ
4.2 Оценка цитотоксического влияния различных концентраций новой лекарственной формы на жизнеспособность клеток определение ТЦДзо
4.3 Противогерпесвирусная активность новой лекарственной формы
4.4 Антигерпесвирусная активность новой лекарственной формы в отношении вариантов вируса простого герпеса, изолированных из клинического материала.
4.5 Противогерпесвирусная активность НЛФ в отношении вариантов вируса простого герпеса с устойчивостью к ацикловиру.
4.6 Противоадсновирусная активность новой лекарственной формы.
4.7 Противогриппозная активность новой лекаревтенной формы
4.7.1 Оценка противогриппозной активности новой лекарственной формы, визуальный учет цитопатического действия вируса
4.7.2 Оценка противогриппозной активности новой лекарственной формы, учет цитопатического действия вируса с использованием автоматического спектрофотометра.
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ СОЧЕТАНИЯ НОВОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ И ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ В ОТНОШЕНИИ ВИРУСА ПРОТОГО ГЕРПЕСА.
5.1 Антигерпесвирусная активность препаратов на модели вируса простого герпеса штамм Л2 в культуре клеток Уего.
5.2 Изучение эффективности комбинирования новой лекарственной формы интерферона и
различных нротивогерпетичсских препаратов двойные комбинации
ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ СОЧЕТАНИЯ НОВОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ И ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ В ОТНОШЕНИИ ВИРУСА ГРИППА
6.1 Противовирусная активность препаратов в отношении вируса гриппа А НМиЗБИ.
6.2 Противовирусная активность комбинаций препаратов и новой лекарственной формы в отношении вирусов гриппа А и А НЗЫ2АюЫ.
6.3 Противовирусная активность комбинаций препаратов и новой лекарственной формы в отношении вируса гриппа А НМиБвЛ при различных способах внесения
исследуемых препаратов
ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Вирус простого герпеса ВПГ один из самых распространенных разновидностей патогенных для человека вирусов. По данным Всемирной организации здравоохранения ВПГ занимает второе место после гриппа, как причина смертности от вирусных инфекций. Впервые ВПГ был открыт Ьоуеп. В настоящий момент принято подразделять ВПГ на две антигенные группы ВПГ1 и ВПГ2. ВПГ1 поражает в основном слизистые ротоглотки, кожные покровы и глаза, ВПГ2 в основном слизистую оболочку гениталий. Но в настоящее время известно, что ВПГ независимо от антигенного типа может поражать все органы и ткани человека. В работе 2 отмечено, что ВПГ1 и ВПГ2 имеют разные молекулярные механизмы патогенеза, в результате репродукции ВПГ1 и ВПГ2 в инфицированных клетках секретируются различные сигнальные молекулы 9. К семейству Негрезушбае так же относятся варицелла зостср, цитомегаловирус, вирус ЭпштейнБарр. Но своей структуре ВПГ относится к ДНК геномным внутриклеточным паразитам, и состоит из трх частей нуклеотида, капсида и белковолипидной оболочки. Вирус герпеса относится к довольно крупным вирусам нм и имеет сложное строение оболочка, окружающая икосаидральный каисид 0 нм, состоящий из 2 капсомсров, между оболочкой и капсидом располагается слой белка, называемый тегумент. При контакте вирусной частицы с клегкоймишенью происходит адсорбция вируса на поверхности клеточного рецептора, расщепление вирусной оболочки и кансида, проникновение вирусной ДНК в ядро клеткимишени. Все процессы протекают под контролем ферментов вирусного происхождения. Показано 7, что на способность к абсорбции ВПГ влияют гепарин и гепарин сульфат, причем в большей степени на ВПГ1, чем на ВПГ2. Дальнейший синтез вирусных белков начинается через 2 часа после инфицирования, достигая максимального значения через 8 часов. Сборка вирусных частиц осуществляется из имеющихся внутри инфицированной клетки аминокислот, белков, липопротеидов и нуклиозидов, которые поступают в клетку из межклеточного пространства по мерс истощения клеточного резерва. Поэтому ВПГ наиболее часто колонизируют кожные покровы и слизистые оболочки. В дальнейшем клеточная оболочка клеткимишени разрушается и происходит выход новых вирусных частиц в межклеточное пространство, где они адсорбируются на клетках окружающих тканей. Первая генерация вирусных частиц начинает поступать в межклеточное пространство через часов. В свободном состоянии вирусы герпеса находятся в течение часов типичная продолжительность острой интоксикации при ВПГ. Средняя продолжительность жизни новой генерации вируса около 3 суток. Для ВПГ характерен так называемый тканевый топизм и латенция. Тканевый топизм это способность постоянно циклично размножаться в тканях, создавая постоянную угрозу развития заболевания. Латенция это пожизненное сохранение вирусов в неявной, морфологически и иммунохимически видоизмененной форме, в нервных клетках регионарных по отношению к месту внедрения гсрпесвируса ганглиях чувствительных нервов. Разные штаммы ВПГ обладают неодинаковой способностью к персистенции и латенции и таким образом неодинаковой чувствительностью к противогерпетичсским препаратам , 2. Показано 4, что ВПГ может поражать не только клетки эпителия преимущественно кератиноциты, но и непосредственно дендритные клетки. Поражение дендритных клеток ВПГ приводит к снижению ими продукции ИФН первого типа и тем самым к распространению инфекции. Более подробно о системе интерферона и патогенезе ВПГ инфекции будет описано в разделе 1. Интсрфероны первого типа и их роль в функционировании иммунной системы человека и патогенезе герпетической, аденовирусной и гриппозной инфекции. По данным исследований 8, к годам около жителей городов инфицированы одним или несколькими штаммами вирусов семейства Негрсь ВПГ 1 и 2го типов, варицелла зостер, цитомегаловирус, вирус ЭпштейнБарр, ВПГ б и 8го типов В большинстве случаев первичное и повторное заражение происходит воздушно капельным путем, а так же через предметы гигиены. Доказаны также оральный, генитальный, орогенитальный, трансфузионный, трансплантационный и трансплацентарный пути передачи инфекции.