Клонирование и экспрессия генов структурных белков Р30 и Р72 вируса африканской чумы свиней

• Автор: Копытов, Валерий Олегович
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 137 с. : ил.

Однако, стандартизация диагностикумов на основе поликлональных антител, выделенных из сывороток крови гипериммунных свиней, часто бывает затруднительной, вследствие различия в физиологическом статусе доноров иммуноглобулинов, появления у них аутоантител. Производство таких препаратов требует больших затрат и сопряжено с необходимостью создания жстких санитарных условий при содержании инфицированных животных. В связи с этим одним из основных путей оперативной и ретроспективной диагностики АЧС, эпизоотологического мониторинга, изучения антигенной структуры и вариабельности вируса является разработка современных высоко специфических методов лабораторной диагностики, способных составить одно из определяющих звеньев комплексной программы по профилактике и контролю АЧС. В связи с выше сказанным основной целью исследований являлось клонирование и экспрессия рекомбинантных антигенов рЗО и р вируса ЛЧС, являющихся облигатными индукторами антителогенеза, пригодных для использования в ИФА. Оценить пригодность рекомбинантных белков для использования их в качестве антигена для постановки серологических реакций. ЗО, для выявления ДНК вируса АЧС в различных вируссодержащих материалах. Получены рекомбинантные белки рЗО и р вируса АЧС в составе плазмидного вектора рТТ9, содержащего целлюлозосвязывающий домен, который позволяет быстро выделить и очистить белок из клеток . Рекомбинантный антиген рЗО пригоден для выявления антител к вирусу АЧС в непрямом варианте ТФ ИФА и не реагирует с сыворотками, специфичными к гетерологичным вирусам. Показана возможность использования полимеразной цепной реакции, целевым геном которой является рЗО, для выявления ДНК вируса ЛЧС в различных вируссодержащих материалах. Разработанная методика получения рекомбинантного антигена рЗО вируса ЛЧС в прокариотическом векторе исключает использование для этой цели живого вируса и позволяет выявлять антитела против вируса АЧС в непрямом варианте ТФ ИФЛ. Антигенная активность и специфичность рекомбинантного белка рЗО была подтверждена комиссионно актЛг2 от . АЧС. Методика получения рекомбинантного антигена рЗО вируса АЧС. Результаты использования непрямого варианта тврдофазного иммуноферментного анализа на основе рекомбинантного белка рЗО для выявления антител к вирусу АЧС. Оптимизация условий постановки полимеразной цепной реакции на основе амплификации последовательности гена рЗО для выявления ДНК вируса АЧС в вируссодержащих материалах. Москва, г. Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов г. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ. Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором в основном самостоятельно. В выполнении работы по разделам 4. ГНУ ВНИИВВиМ Власова , Цыбанова Л. Я., а также сотрудники ВНИИСБ Лунин В. Г. и Колобова О. Африканская чума свиней вирусная болезнь, характеризующаяся высокой контагиозностью и летальностью, сверхострым, подострым, острым и хроническим течением. До г. Южной Африке. В г. Португалии, г. Испании, г. Франции, г. Италии, г. Кубе. В этих странах АЧС протекала в форме обширных эпизоотий с поражением огромного поголовья. Так, в Испании за период с по гг. Спорадические вспышки также происходили и были искоренены в Бразилии, Доминиканской республике, Гаити, Бельгии, Голландии и на Мальте. В середине ых годов АЧС была ликвидирована в Европе за исключением Сардинии, но появилась вновь в Португалии в г. В году болезнь впервые проникла на Мадагаскар 6. В Африке АЧС является природноочаговой болезнью. Если первые вспышки АЧС в Европе сопровождались практически 0ной гибелью заболевших животных, то в дальнейшем наблюдалось снижение вирулентности возбудителя и течение болезни изменялось от острого к хроническому 3, , , 0. Вирус АЧС в основном передатся алиментарным путм. Именно по цели инфицированные продукты пищевые отходы чувствительные животные вирус был занесн в ранее благополучные страны. Затем в стадах свиней реализуются дополнительные пути передачи возбудителя респираторный и трансмиссивный. Вирус АЧС может передаваться и плацентарно, вызывая аборты у супоросных свиноматок 2, ,, 1, 5, 0.