Получение и изучение свойств козьих и овечьих лечебно-профилактических иммуноглобулинов против болезни Эбола

• Автор: Зубавичене, Наталья Маратовна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 134 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Перечень сокращений

Введение.

Г лава 1. Обзор литературы.

1.1. Краткая характеристика геморрагической лихорадки Эбола

1.1.1. История открытия заболевания

1.1.2. Клинические проявления болезни

1.1.3. Лечение.

1.2. Вирус Эбола.

1.2.1. Электронная микроскопия и строение вирионов.

1.2.2. Биологические свойства вируса.

1.2.3. Иммуносупрессивные свойства вируса Эбола
1.2.4. Инактивация вируса Эбола
1.2.5. Лабораторные животные для изучения лихорадки Эбола
1.3. Иммунопрофилактика и иммунотерапия
1.3.1. Возможность активной иммунизации
1.3.2. Эффективность иммунотерапевтических препаратов
1.3.3. Механизм действия иммуноглобулинов
1.3.4. Особенности применения гетегологичных иммуноглобулинов
1.4. Способы получения гипериммуных гетерологичных сывороток
и их фракционирование.
1.4.1. Получение гетерологичных гипериммунных сывороток
1.4.2. Способы фракционирования иммунной сыворотки плазмы.
1.5. Заключение по обзору литературы
Глава 2. Материалы, методы и объем исследований.
2.1. Вирус
2.2. Животные, культуры клеток, растворы
2.3. Титрование вируса
2.4. Серологические реакции
2.5. Получение иммунных сывороток животных.
2.5.1. Иммунизация кроликов
2.5.2. Иммунизация овец и коз
2.5.3. Отбор крови у животных и инактивация иммунных сывороток
2.6. Методы фракционирования.
2.6.1. Спиртовое осаждение на холоду по Кону.
2.6.2. Анионообменная хроматография на Полисиле С А
2.7. Определение концентрации белка
2.8. Изучение анафилактогенности препаратов
2.9. Изучение пирогснности и токсичности препаратов имуноглобулина.
2 Методы определения профилактического эффекта иммуноглобулина
2 Испытание реактогенности и безвредности козьего иммуноглобулина против болезни Эбола на ограниченной группе людей добровольцах.
2 Статистическая обработка результатов.
Глава 3. Результаты исследований. Получение иммунной
сыворотки овец и коз.
3.1. Изучение иммуногенных свойств различных препаратов
вируса Эбола Заир в опытах на кроликах.
3.2. Обоснование выбора животныхиродуцентов иммунной сыворотки
3.3. Иммунизация овец и коз. Получение гипериммунной сыворотки
3.4. Изучение вируснейтрализующей активности полученных иммунных сывороток против различных штаммов вируса Эбола и
вируса Марбург
3.5. Исследование животныхдоноров и полученной иммунной сыворотки на отсутствие вирусоносительства и контаминации вирусом Эбола.
3.6. Обсуждение.
Глава 4. Фракционирование иммунной сыворотки и характеризация полученного препарата иммуноглобулина
4.1. Анализ распределения антител по фракциям и их соотношение в зависимости от цикла иммунизации.
4.2. Сенсибилизирующие свойства подклассов иммуноглобулинов козы
4.3. Анализ качества 4х серий козьего и 3х серий овечьего иммуноглобулинов, полученных спиртовым методом.
4.4. Изучение сенсибилизирующих свойств препаратов козьего и овечьего иммуноглобулинов
4.5. Обсуждение.
Глава 5. Изучение профилактического эффекта козьего иммуноглобулина против болезни Эбола
5.1. Зависимость профилактического эффект иммуноглобулина
от сроков и кратности ведения
5.2. Анализ динамики циркулирования козьего иммуноглобулина
в крови обезъян.
5.3. Обсуждение.
Глава 6. Проведение испытаний козьего иммуноглобулина против болезни Эбола на ограниченной группе людей добровольцах
6.1. Анализ сенсибилизирующей активности, токсичности и пирогенности препарата ЮО
6.2. Анализ динамики циркулирования иммуноглобулина в
крови добровольцев
6.3. Обсуждение.
Глава 7. Применение козьего иммуноглобулина для экстренной профилактики лихорадки Эбола у сотрудников, допустивших
аварию, с возможностью инфицирования
Заключение. НО
Выводы
Список литературы


В тоже время в связи с нарастанием миграции населения, массовым туризмом, экспортом животных, в том числе нелегальным, увеличивается риск переноса этой тяжелой инфекции с Африканского континента в страны Америки, Азии и Европы, в том числе и в нашу страну. Это усиливает актуальность создания средств защиты против этого заболевания. Поскольку вирус Эбола относится к 1й группе вирусных инфекций, все операции с активным вирусным материалом проводятся в лабораториях с максимальным уровнем защиты. Однако это не дает полной гарантии от инфицирования персонала в результате лабораторных аварий. Это обстоятельство также требует наличия средств экстренной профилактики. Эффективным средством экстренной профилактики вирусных заболеваний является пассивная иммунизация, основной принцип которой заключается в переносе антител в виде сыворотки или гаммаглобулина от иммунного хозяина к неиммунному. Противовирусное действие антисыворотки опосредовано механизмом нейтрализации вируса антителами. Включение этого процесса сразу после введения антител в организм позволяет использовать антисыворотку в качестве экстренной меры защиты, когда нет времени для получения активного иммунного ответа или когда отсутствует вакцина. Большинство прогективных сывороточных препаратов, применяемых в медицине, производится из плазмы или сыворотки человека. Однако, иногда возможности получения гомологичных иммунотерапевтических препаратов крайне ограничены. Например, сложно получить препараты против экзотических вирусных инфекций с высокой степенью летальности. В этих случаях целесообразно использовать гетерологичные сыворотки или глобулины. В связи со сказанным нами была проделана работа по созданию гетерологичного лечебнопрофилактического иммуноглобулина против болезни Эбола и оценке свойств полученного препарата. В данной работе описаны полученные результаты. Цель и задачи исследования. Цель работы посредством иммунизации коз овец получить иммуноглобулиновый препарат, обладающий протективными свойствами против болезни Эбола. Подобрать условия иммунизации для получения сывороток крови овец и коз с высокими титрами нейтрализующих антител против болезни Эбола. Изучить лечебнопрофилактические и лабораторноклинические свойства полученных иммуноглобулинов. Разработать методику их применения. Научная новизна. Результаты исследований представляют собой разработку иммунологических аспектов получения иммуноглобулина, специфичного к вирусу Эбола. Определено развитие гуморального ответа в ходе иммунизации коз, что существенно расширяет представление о механизмах патогенного действия вируса Эбола и реакции организма на вирусную инфекцию. Получены новые данные об особенностях иммунного ответа у чувствительных и нечувствительных к вирусу Эбола видов животных морские свинки, кролики, овцы, козы. Изучен спектр антител гипериммунной сыворотки у козпродуцентов. Установлено, что только иммунизация активным вирусом позволяет получить сыворотку с высокими нейтрализующими свойствами. Иммунизация инактивированным вирусом ведет к продукции сыворотки с высокими титрами антивирусных антител, диагностируемых в ИФА, но обладающих низкими вируснейтрализующими свойствами. Показано, что наибольшей протективной вируснейтрализующей активностью обладает подкласс С2 козы. Именно этот подкласс преобладает в готовой форме препарата иммуноглобулина против болезни Эбола. Практическая значимость. Разработаны условия получения производственных количеств гипериммунной сыворотки коз и профилактического иммуноглобулина. Проведена оценка профилактических свойств иммуноглобулина против болезни Эбола на лабораторных животных. Разработаны практические рекомендации по схеме применения серопрепарата в комплексе мер экстренной профилактики болезни Эбола. Разработаны нормативные документы на изготовление козьего овечьего иммуноглобулина против болезни Эбола и на его практическое использование Инструкция по изготовлению и контролю, Проект Временной Фармакопейной статьи, Инструкция по применению, Программа испытаний на добровольцах, Отчет о доклинических испытаниях.