Получение и диагностическая ценность биспецифических моноклональных антител к IgG свиньи и флуоресцеину

• Автор: Середа, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 120 с. : ил

Причем для постановки иммуноферментного или иммунофлюоресцентного анализа в этом случае не потребуется приготовления конъюгатов антител с ферментами или флюорохромами. Например, использование в непрямом ИФА биспецифических моноклональных антител, одна из специфичностей которых направлена против метки флюорохрома или иного гаптена, а вторая против определяемого иммуноглобулина, позволит, вопервых, применить одно и то же антитело в МФА и ИФА без какойлибо его дополнительной модификации и, вовторых, применять в ИФА широкий спектр ферментов, которые просто достаточно пометить гаптеном. Таким образом, бивалентные можно использовать с научнопрактической целью в области общей биологии, медицины и ветеринарии, в частности для лабораторной диагностики вирусных болезней животных. Одним из ведущих лабораторных тестов в диагностике вирусных болезней животных остается метод иммунофлуоресценции. В непрямом МФА в качестве первых антител используют немеченные антитела, а в качестве вторых меченные флуорохромом антитела к иммуноглобулинам. Получение бивалентных моноклональных антител, антигенсвязывающий сайт первого плеча которых специфичен к свиньи, а антигенсвязывающий сайт второго к флуоресцеину, может значительно упростить технологию приготовления диагностикумов. Если учесть, что на молекулах свиньи имеются общие детерминанты с других видов сельскохозяйственных животных, то диапазон применения таких биспецифических антител может быть значительно более широким. Вышеперечисленными обстоятельствами обусловлен выбор поставленной перед нами цели работы получение квадром, продуцирующих бивалентные моноклональные антитела, специфичные к свиньи и флуоресцеину, и определение их диагностической ценности. Получены клетки клонов квадром, секретирующие бисайтспсцифические моноклональные антитела к флуоресцеину и свиньи. Показано, что биспецифические иммуноглобулиновые молекулы сохраняют антигенную специфичность, свойственную родительским клонам. Продемонстрировано, что специфичность бисайтспецифических моноклональных антител к флуоресцеину позволяет использовать ФИТЦ для индукции связывания этих антител с различными ферментами, меченными ФИТЦ. Показана возможность использования биспецифических моноклональных антител в диагностических реакциях. Установлено, что пероксидазные антивидовые конъюгаты, изготовленные из моноклональных антител к 1в свиньи обладают высокой специфической активностью, низкой спонтанной сорбцией и пригодны для диагностических и исследовательских целей. В ходе исследований адаптирован ряд методических приемов селекция клеток квадромных клонов, метод частичной хроматографической очистки бисайтспецифических иммуноглобулинов, скрининг биМКА в оиЫеапепИФА, которые могут быть применены при проведении НИР в области гибридомной технологии и биотехнологии бисайтспецифических иммунореагентов для белков и гаптенов. Получены, охарактеризованы и заложены на хранение по два клона гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к флуоресцеину и I свиньи, а также два клона квадром, продуцирующих бисайтспецифические моноклональные антитела к флуоресцеину и I свиньи. Пероксидазные конъюгаты моноклональных антител к I применяются в диагностических исследованиях на КЧС. Комплекс адаптированных методических приемов позволяет получать квадромы, продуцирующие бисайтспецифические моноклональные требуемой белковой и гаптенной специфичности. Культуральноморфологические, пролиферативные, селективные маркерные свойства и характеристики антителопродукции мутантных субклонов гибридомных клеток в процессе культивирования i vi и i viv сохраняются. Специфичность биМКА к флуоресцеину позволяет использовать ФИТЦ в качестве гаптенной метки различимых ферментов для использования их в ИФА и иммуноцитохимических методах. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Международной научнопрактической конференции, посвященной летию ВНИИВВиМ Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзотическими болезнями животных 9 декабря, г. Ученого Совета ВНИИВВиМ апреля г.