Разработка тест-системы для идентификации вируса арктического бешенства на основе методов анализа генома

• Автор: Цыбанов, Ярали Содномович
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 136 с. : ил

Одним из эффективных методов быстрой диагностики бешенства является иммуноферментный метод определения вирусных антигенов с использованием поликлональных и моноклональных антител. Метод ИФА позволяет выявлять рабический антиген с титром инфекционного вируса не менее 3,3 МЛД5омл и процент выявления вируса бешенства составляет ,2. Следует отметить, что основным недостатком серологических методов и биопробы является то, что они не позволяют работать с деградированным патологическим материалом 2, ,. В последние годы, в связи с широким распространением арктического бешенства за пределы полярного круга, возрастает актуальность этой проблемы. А. Д. Ботвинкиным с сотрудниками с помощью набора моноклональных антител была исследована антигенная вариабельность изолятов вируса бешенства, выделенных от животных и человека с по гг. России 4. Изоляты вируса бешенства, циркулирующего на северовостоке нашей страны, имели общие эпитопы с изолятами с Аляски и северозападных территорий Канады. Изоляты, имеющие маркер арктического варианта вируса бешенства, впервые были обнаружены в умеренных широтах России в виде отдельных очагов, наиболее крупный из которых находится в Прибалтийском регионе 4, И, , . Забайкалье, Тува, Якутия на удалении до км от Северного полярного круга, в северозападных районах России Калининградская, Псковская, Ленинградская области, в Прибалтике и Белорусии до км 4, , . На американском континенте вирус арктического бешенства также обнаружен не только на Аляске, СевероЗападных территориях Канады, но и
в умеренных широтах в штатах Онтарио, Квебек, НьюЙорк, то есть до северной широты 6, 9, 2. Хотя вирус арктического бешенства не патогенен для человека, однако, дифференциация штаммов и изолятов классического и арктического бешенства, а также поиск генетических маркеров является важной задачей , , 7. Анализ данных литературы показывает, что несмотря на все преимущества традиционных методов диагностики бешенства, во многих лабораториях за рубежом и в нашей стране все шире и шире для лабораторной диагностики используются методы молекулярной гибридизации и полимеразной цепной реакции. Преимуществом этих методов является их высокая чувствительность, специфичность, быстрота и безопасность , 7. В настоящее время ПЦРтехнологию применяют в комбинации с секвенированием, что делает ее незаменимым, очень чувствительным методом идентификации вируса и определения его родства в отношении других штаммов. Для сравнительной характеристики геномов штаммов вирусов также проводят рестрикционный анализ ПЦР продуктов. Исходя из вышесказанного, целью данной работы являлась разработка тестсистемы для идентификации вирусов классического и арктического бешенства на основе анализа генома. ТС и гена нуклеопротеина вируса арктического бешенства с целью установления генетического родства. Определена нуклеотидная последовательность фрагментов гена нуклеопротеина и псевдогена размерами 8 и 0 п. ТС. При сравнении нуклеотидных и аминокислотных последовательностей этих участков генома с другими вакцинными штаммами вируса бешенства установлено, что штаммы ТС и В имеют гомологии. Впервые определена нуклеотидная последовательность гена нуклеопротеина двух изолятов вируса арктического бешенства, выделенных на территории Якутии. Установлена высокая однородность нуклеотидных последовательностей якутских изолятов и изолятов арктической зоны Канады и Гренландии , а также последовательностей изолятов, выделенных в районе залива Гудзон Канада, и изолята из Красноярского края Россия. Проведена дифференциация изолятов вируса арктического бешенства, выделенных в Республике Якутия, от полевых изолятов возбудителя классического бешенства методом рестрикционного анализа продуктов П,Р. Практическая значимость. Предложен способ дифференциации вакцинных штаммов и нолевых изолятов вирусов арктического и классического бешенства на основе рестрикционного анализа ПЦР продукта, который может быть использован для паспортизации производственных штаммов и идентификации полевых изолятов вирусов арктического и классического бешенства. ТС и полевых изолятов вируса арктического бешенства.