Биологические свойства вируса парагриппа собак и разработка метода диагностики болезни

• Автор: Мухин, Алексей Николаевич
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 122 с. : ил.

Оглавление
Список используемых сокращений
Введение
1 .Обзор литературы
1.1. Распространение парагриппа собак
1.2. Патогенез, клинические и патологоанатомические изменения при парагриппе собак
1.3. Систематика и морфология вируса парагриппа собак
1.4. Патогенность вируса для естественно-восприимчивых и лабораторных животных
1.5. Культуральные свойства вируса парагриппа собак
1.6. Диагностика парагриппа собак
1.7.Серологические методы диагностики
1.8. Специфическая профилактика парагриппа собак
1.9. Заключение
2. Собственные исследования
2.1. Материалы и методы
2.2. Изучение морфологии вирионов штамма «Рикан» вируса парагриппа собак
2.3. Анализ полипептидного состава штамма «Рикан» вируса парагриппа собак
2.4.Изучение гемагглютинирующих свойств вируса парагриппа собак
2.4.1. Подбор вида эритроцитов и pH среды при постановке РГА с вирусом парагриппа собак
2.4.2. Влияние температурных условий на РГА с вирусом парагриппа собак
2.5. Изучение культуральных свойств вируса парагриппа собак

2.5.1. Культивирование вируса в различных клеточных системах
2.5.2. Изучение влияния заражающей дозы на накопление вируса в культуре клеток
2.5.3. Определение динамики накопления вируса в культуре клеток
2.6. Подбор защитной среды для лиофилизации вируса парагриппа собак..„59
2.7. Определение оптимальных условий постановки РТГА для обнаружения специфических антител к вирусу парагриппа собак
2.7.1. Изучение влияния продолжительности контакта вируса с иммунными сыворотками на выявление тормозящих агглютинацию антител
2.7.2. Подготовка сывороток крови собак к исследованию
2.8. Изучение патогенности и антигенной активности вируса парагриппа для собак
2.9. Изучение патогенности и антигенной активности вируса парагриппа собак для лабораторных животных
2.10. Получение диагностических сывороток к вирусу парагриппа собак
2.10.1. Гипериммунизация кроликов с использованием различных схем введения антигена
2.10.2. Определение специфичности диагностических сывороток
2.11. Изготовление сухого инактивированного парамиксовирусного антигена
2.12. Формалинизация эритроцитов морской свинки
2.13. Изготовление «Набора для обнаружения антител к вирусу парагриппа собак в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)»
2.13.1. Проверка специфичности «Набора для обнаружения антител к вирусу парагриппа собак в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)»
2.13.2. Изучение чувствительности «Набора для обнаружения антител к вирусу парагриппа собак в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)»
2.13.3. Изучение стандартности «Набора для обнаружения антител к вирусу парагриппа собак в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)»
2.14. Применение «Набора для обнаружения антител к вирусу парагриппа собак в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)» для исследования «полевых» сывороток собак
2.15. Изучение накопления специфических гуморальных антител к вирусу
парагриппа у собак, вакцинированных ассоциированными вакцинами
3. Обсуждение
Выводы
Практические предложения
Список литературы
Приложение

Для выращивания первично трипсинизированных и субкультур клеток ПЩ и ПК использовали ростовую питательную среду следующего состава:
гидролизат лактоальбумина -50%
среда Игла МЕМ с глутамином -20%
среда 199 -20%
сыворотка КРС -10%
гентамицин - 10 мг/л
Культуры клеток ФЭК и ФЭП культивировали на ГЛА с 10% сыворотки КРС и гентамицином.
Для выращивания перевиваемых линий клеток использовалась питательная среда RPMI 1640 с добавлением 5 % фетальной сыворотки крупного рогатого скота и гентамицина в концентрации 10 мкгмл.
В качестве поддерживающих использовали бессывороточные среды того же состава.
Получение культуральной вирусной расплодки
Заражение культур клеток проводили на сформированный монослой, для чего из матрасов удаляли ростовую среду, культуру клеток отмывали от сыворотки раствором Хенкса и вносили вируссодержащий материал из расчета 0,2 lg ТЦД5о/клетку. Через 1 час в культуральные матрасы добавляли поддерживающую среду и инкубировали при 37°С. На 6-8 сутки, при появлении выраженного цитопатического действия с поражением 80-90% монослоя, культуру клеток с вирусом замораживали при температуре -20°С.
Инфекционную активность вируса устанавливали методом титрования в культуре клеток MDCK на 96-луночных планшетах для культур клеток фирмы “Costar”. Для этого готовили десятикратные разведения вируса от 10'1 до 10'9 на поддерживающей среде. Каждым разведением заражали по 4 лунки с культурой клеток в объеме 0,2 мл, предварительно удалив ростовую