Конструирование и иммунологическая характеристика рекомбинантных полипептидов, содержащих антигенные детерминанты белков вируса гепатита С

• Автор: Гринев, Андриян Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.06, 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

2.1 Клинические особенности гепатита С.

2.2 Молекулярная характеристика генома вируса гепатита С

2.2.1 Структурные белки ВГС

2.2.2 Неструктурные белки ВГС

2.2.3 Нетранслируемый участок генома ВГС.

2.3 Вариабельность вируса гепатита С и связанные с ней проблемы лабораторной диагностики
2.3.1 Изменчивость вирусного генома.
2.3.2 Диагностика вирусного гепатита С
2.3.2.1 Детекция антител к белкам ВГС.
2.3.2.2 Определение РНК ВГС.
2.3.2.3 Изменчивость генома ВГС и диагностика.
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3.1 МАТЕРИАЛЫ.
3.2 МЕТОДЫ
3.2.1 Компьютерный анализ генома вируса гепатита С
3.2.2 Методы генной инженерии.
3.2.3 Иммунологические методы.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1 Компьютерный анализ генома вируса гепатита С
поиск потенциальных антигенных детерминант вирусных белков.
4.1.1 Белок вируса гепатита С
4.1.2 Белок 3 вируса гепатита С.
4.1.3 Белок 4 вируса гепатита С.
4.1.4 Белок 5 вируса гепатита С
4.2 Сборка и клонирование фрагментов генома вируса гепатита С
4.2.1 Сборка фрагмента гена из олигонуклеотидов
4.2.2 Сборка фрагментов гена 3 из олигонуклеотидов
4.2.3 Сборка фрагментов гена 4 из олигонуклеотидов
4.2.4 Сборка фрагмента гена 5 из олигонуклеотидов
4.3 Получение рекомбинантных белков, содержащих антигенные
детерминанты белков вируса гепатита С
4.3.1 Получение и очистка рекомбинантного белка,
содержащего фрагмент белка вируса гепатита С.
4.3.2 Получение и очистка рекомбинантных белков,
содержащих фрагменты белка 3 вируса гепатита С
4.3.3 Получение и очистка рекомбинантных белков, содержащих фрагменты белков
вируса гепатита С субтипы 1Ь,2а,За.
4.3.4 Получение и очистка рекомбинантного белка,
содержащего фрагмент белка 5 вируса гепатита С
4.4 Изучение антигенной активности и специфичности
полученных рекомбинантных белков
4.4.1 Исследование антигенной активности рекомбинантных белков методом непрямого
твердофазного иммуноферментного анализа ИФА
4.4.2 Исследование антигенной специфичности
рекомбинантных белков методом иммуноблоттинга
4.5. Создание иммуноферментной тестсистемы
для определения антител к ВГС в сыворотках крови.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


С. и др. В России и странах СНГ гепатит С распространен повсеместно, антитела к ВГС выявляются у 1,4 безвозмездных доноров, что примерно в два раза выше, чем в развитых странах Европы и США . Наибольшее распространение ВГС получил в странах Африки и Юговосточной Азии, где число инфицированных составляет 47 Viv . В настоящее время вирусный гепатит С стал рассматриваться во всем мире как чрезвычайно актуальная проблема здравоохранения. Главным образом это связано со все большим распространением методов лечения, включающих внутривенные инъекции, переливание крови и пересадку органов и тканей . Вирус гепатита С передается, в основном, через цельную кровь, компоненты крови, либо через другие жидкости и ткани тела человека. Основным фактором риска, достигающим , является наркомания. Инфицирование ВГС наркоманов достигает в некоторых регионах и нередко наблюдается в сочетании с инфицированием вирусами гепатитов В, и ВИЧ Н. i i V. У 2 больных заражение происходит при гемодиализе и трансплантации органов ii . . . Относительно низкий уровень виремии делает эпидемиологически менее значимыми непарентеральные механизмы передачи инфекции сексуальные, бытовые и профессиональные контакты составляют в совокупности не более фактора риска . . . Особенностью вируса гепатита С является способность к длительной персистенции в организме больного, что обуславливает уровень хронизации инфекции. Молекулярным механизмом неполной элиминации вируса под воздействием иммунного ответа является чрезвычайная генетическая изменчивость вируса. После заражения, популяция вируса у каждого больного представлена множеством одновременно существующих генетически различающихся вариантов квазивидов. Степень гетерогенности спектра квазивидов у конкретного больного имеет важное значение и определяет тяжесть течения гепатита и эффективность противовирусной терапии i . . . . X. Разнообразие вирусных генотипов создает трудности в диагностике и лечении вирусного гепатита С и отодвигает на неопределенную перспективу разработку вакцины. Разработка диагностических препаратов для выявления гепатита С неразрывно связана с историей изучения вируса, ставшей возможной только после существенного развития методов молекулярной биологии и генной инженерии. В начале х годов исследователи компании i приступили к изучению ни А ни В посттрансфузионного гепатита. Вопрос о существовании нового вируса возник в е годы. В, маркеры которого не выявлялись изза недостаточной чувствительности использующихся тестсистем. В последующем детальный анализ ряда случаев позволил предположить существование отличной от гепатитов А и В формы посттрансфузионного гепатита, названного гепатитом ни А ни В, который и получил затем название гепатита С. В году и соавторам . С. Работа по расшифровке полного генома ВГС была успешно завершена в году, в этом же году появилась первая диагностическая тестсистема V I, которая позволяла определять в крови больных антиВГС антитела класса I. В году японские исследователи завершили расшифровку полного генома первого японского изолята ВГС . Тогда же была создана оригинальная японская тестсистема для определения антител к ВГС. За прошедшие с той поры десять лет был достигнут значительный прогресс в изучении ВГС. Расшифрованы сотни полных и неполных последовательностей геномов вирусов гепатита С со всех регионов планеты. Показаны большая вариабельность и изменчивость ряда вирусных генов. Составлена современная классификация субтипов ВГС . На данный момент, повсеместно внедрены в практику различные типы диагностических препаратов, которые позволяют выявлять как антитела к вирусным белкам в крови больных ВГС, так и компоненты вируса РНК, вирусные белки. Учитывая напряженную эпидемиологическую обстановку в СНГ и в России, разработка отечественных тестсистем и их компонентов постоянно остается крайне актуальной задачей.