+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Выявление геномов возбудителей аденоматоза и висна-маеди овец с помощью полимеразной цепной реакции

  • Автор:

    Бурдинский, Владимир Геннадьевич

  • Шифр специальности:

    03.00.06

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2009

  • Место защиты:

    Покров

  • Количество страниц:

    114 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы


ОГЛАВЛЕНИЕ
Оглавление
Список сокращений
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1.Актуальность избранной темы работы
1.2. Цель и задачи исследований
1.3. Научная новизна работы
1.4. Практическая значимость
1.5. Публикации результатов исследований
1.6. Апробация материалов исследований
1.7. Личный вклад соискателя
1.8. Основные положения, выносимые на защиту
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Структура и организация генома вирусов аденоматоза легких овец и висна-маеди
2.2. Филогенетический анализ возбудителей аденоматоза легких и висна-маеди овец
2.3. Характеристика аденоматоза легких овец
2.3.1. Распространение аденоматоза легких овец
2.3.2. Классические методы диагностики аденоматоза легких овец
2.3.3. Молекулярная диагностика аденоматоза лёгких овец
2.4. Характеристика висна-маеди овец
2.4.1. Распространение висна-маеди овец
2.4.2. Классические методы диагностики висна-маэди овец
2.4.3. Молекулярная диагностика висна-маеди
2.5.Создание диагностических тест-систем на основе использования ПЦР
2.6. Заключение по обзору литературы
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материалы
3.1.1. Вирусы
3.1.2. Кровь и патологический материал
3.1.3. Ферменты
3.1.4. Реактивы
3.1.5. Культуры клеток
3.1.6. Лабораторное оборудование
3.2. Методы
3.2.1. Приготовление гистологических срезов
3.2.2. Получение форменных элементов крови
3.2.3. Выделение нуклеиновых кислот
3.2.4. Синтез к ДНК
3.2.5. Постановка ПЦР
3.2.6. Анализ ПЦР продуктов
3.2.7. Компьютерный анализ
3.2.8. Подготовка ПЦР-фрагментов для секвенирования методом гель-электрофореза и очистки с №1
3.2.9. Определение первичных нуклеотидных последовательностей
3.2.10. Рестрикция
3.2.11. Клонирование ПЦР фрагмента в плазмидном векторе
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Выбор метода выделения вирусной РНК
4.2. Выявление животных подозрительных на аденоматоз легких овец
4.3. Проведение гистологических исследований
4.4. Разработка тест-системы для выявления РНК вируса аденоматоза овец методом полимеразной цепной реакции
4.4.1. Подбор праймеров
4.4.2. Оптимизация синтеза кДНК
4.4.3. Оптимизация условий постановки ПЦР
4.4.4. Определение специфичности метода ПЦР для выявления генома АЛО
4.5. Определение нуклеотидной последовательности возбудителя аденоматоза легких овец
4.6. Проведение исследований по выявлению генома возбудителя аденоматоза легках овец в пробах крови овец
4.7. Разработка набора препаратов для выявления РНК вируса висна-маеди овец методом полимеразной цепной реакции
4.7.1. Подбор праймеров
4.7.2. Оптимизация условий постановки ОТ-ПЦР
4.7.3. Клонирование ПЦР-фрагмента вируса висна-маеди
4.7.4. Определение специфичности и чувствительности метода ПЦР
4.8. Секвенс музейного штамма вируса ВМ
5. ОБСУЖДЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Приложение А Методические указания по выявлению генома
вируса аденоматоза методом полимеразной цепной реакции
Приложение Б Методические указания по выявлению генома
вируса висна-маеди методом полимеразной цепной реакции
Приложение В Состав тест-системы для выявления РНК
вируса аденоматоза легких овец с помощью полимеразной цепной реакции
Приложение Г Состав тест-системы для выявления РНК
вируса висна-маеди с помощью полимеразной цепной реакции

оптимально подобранных производителем реактивов и условий постановки данного типа реакции.
Так при диагностике гепатита В чувствительность ПЦР составляет 10-100 вирусных частиц в миллилитре, тогда как с помощью дот-гибридизации чувствительность составляет 3000 вирусных частиц в миллилитре [78].
Сравнение эффективности обнаружения энтеровирусов при помощи выделения вируса на культуре клеток и использования ПЦР показал в 100 раз большую чувствительность метода ПЦР [53].
Повысить чувствительность ПЦР тест-системы возможно использованием «гнездовых праймеров» - последовательное проведение ПЦР с использованием двух пар праймеров. Так при использовании одной пары праймеров при помощи ПЦР выявляется 100 фг ДНК цитомегаловируса в пробе, а при использовании «гнездового» варианта -выявляется до 5-10 фг [64].
ПЦР успешно используется для выявления генома вируса иммунодефицита человека [79], простого герпеса-1 [60], инфекционной анемии [172], цитомегаловируса [32, 74].
В ветеринарной практике ПЦР тест-системы используются, например, для обнаружения и идентификации вируса ЛДР [173], вируса африканской чумы лошадей [43], полевых изолятов вируса РРСС [203], гриппа А [186], ротавирусов КРС [24].
И, наконец, в диагностических тест-системах продукты амплификации могут быть представлены в качестве положительного контроля при ПЦР-анализе, что позволяет избежать трудоемких процедур по выделению и очистке геномов различных возбудителей. Для получения биологически безопасного альтернативного источника последовательности генома, выявление которой проводится с помощью разрабатываемой тест-системы, используется клонирование ПЦР-продукта в составе плазмидного вектора [67, 45].

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.109, запросов: 967