Н+-АТФаза и транспорт ионов через вакуолярную мембрану дрожжей Saccharomyces carlsbergensis

• Автор: Кулаковская, Татьяна Валентиновна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Пущино-на-Оке
• Количество страниц: 162 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сохфащений .

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. Функции вакуолей в клетках грибов и растений . .

1. Методы исследования вакуолей

2. Вакуолълизосома дрожжевой и растительной клетки. . II

3. Вакуолярная компартментация низкомолекулярных метаболитов, и участие вакуоли в регуляции их содержания в цитоплазме

ГЛАВА 2. Транспорт веществ через вакуолярную мембрану . .

1. Белковолипидный состав тонопласта

2. Характеристика некоторых транспортных систем вакуолярной мембраны.

3. АТФзависимый транспорт в изолированные вакуоли и везикулы тонопласта
ГЛАВА 3. ЕАТФаза основной фермент, энергизующий
транспорт через мембрану вакуолей
1. Свойства АТФазы вакуолей
2. АТФаза вакуолей электрогенная Етранслоказа . .
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ . . . . .
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
1. Выращивание дрожжей.
2. Получение сферопластов из дрожжевых клеток
3. Выделение вакуолей
4. Выделение тонопласта . .
5. Солюбилизация и очистка вакуолярной АТФазы
6. Аналитические методы
Определение активностей ферментов
стр.
Глгокозо6фосфаТД8Гдцрогеназа
Сукцинатдегидрогеназа
оганнозидаза.
Неспецифическая фосфатаза
АТФаза и другие фосфогидролазы.
Определение ортофосфата
Определение белка .
Определение ДрН и Е.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЭДЕНИЕ.
ГЛАВА I. Обнаружение специфической АТФазы в вакуолях
дрожжей.
1. Характеристика препарата вакуолей, выделенных из клеток дрожжей .
2. Сравнение свойств АТФазной и других фосфогидролазных активностей вакуолей дрожжей
3. Солюбилизация АТФазы из вакуолей дрожжей и очистка ее от других вакуолярных фосфо
гидролаз
ГЛАВА 2. Транспортные системы вакуолярной мембраны
дрожжей.
1. АТФаза главный протонный насос вакуолярной мембраны.
2. Пирофосфатаза второй протонный насос вакуолярной мембраны .
3. Нион антипорт основной механизм транспорта
ионов через тонопласт дрожжей .
4, Анионный канал вакуолярной мембраны и модификация его катионами металлов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


АТФазы в вакуолярной мембране i, Палладина, . i специфическая АТФаза, а также оценить ее возможное участие в энергизации транспорта ионов через вакуолярную мембрану у этих дрожжей. Изучить свойства АТФазной и других фосфогидролазных активностей вакуолей дрожжей . АТФазная активность другими фосфогидролазами вакуолей. Солюбилизировать и очистить от других фосфогидролаз АТФазу из вакуолей . Выяснить, способна ли АТФаза вакуолей . ДИН4 через мембрану этих органелл. Может ли пирофосфатаза вакуолей выполнять функцию протонного насоса. Определить, могут ли ионы, накапливающиеся в вакуолях i viv использовать создаваемый АТФазой АиЧ для своего транспорта. Изучить, как некоторые ионы влияют на формирование химического градиента ионов водорода грН и мембранного потенциала через вакуолярную мембрану и могут ли эти ионы изменять анионную проницаемость тонопласта. ГЛАВА I. Вакуоли грибных и растительных клеток являются самыми крупными органеллами, видимыми в световой микроскоп. Считается, что вакуоли являются неотъемлемой частью сложной системы лизосомалъного характера, включающей эндоплазматический ретикулюм, аппарат Гольджи, а также периплазматическое пространство v, . Эта сложная система мембран дает начало везикулам, которые в процессе роста и развития клеток увеличиваются в размерах, сливаются друг с другом. Большая центральная вакуоль является конечным продуктом деятельности всей системы, для которой был предложен термин вакуом v, . Для биохимических исследований используется в основном большая центральная вакуоль, так как ее размеры облегчают идентификацию и выделение. . i, , . , , до I М i, с сохранением в них пула низкомолекулярных веществ. Однако, выделение вакуолей из каждого конкретного объекта црежнему представляет собой трудоемкую задачу, так как свойства вакуолей, определяющие возможность их очистки от других клеточных органелл, изменяются в зависимости как от объекта исследования, так и от условий культивирования. В связи с этим метод последовательной экстракции сохраняет свою ценность. Он основан на способности некоторых полимеров основного характера, таких как ДЭАЭдектран i . . При обработке клеток этими поликатионами в присутствии осмотического стабилизатора экстрагируются растворимые вещества только из цитоплазмы, вакуоли остаются интактными. Содержимое вакуолей экстрагируется затем при обработке клеток водой. Указанным методом изучено распределение между цитозолем и вакуолью серусодержащих компонентов . i, , , ионов Личко И др. v . i, , i . Ферментативные активности изолированных вакуолей были исследованы в ряде лабораторий. Видно, что цри выделении вакуолей обогащаются различные гидролазы. По данным Вимкена i . В, карбоксипептидазы У, около оСманнозидазы от общей активности в клетке. Авторы считают, что дрожжевая вакуоль является основным компартментом литических ферментов Vi . Фермент Отношение удельных активностей Лманнозидаза, кислая фосфатаза. Общий вывод, поддерживаемый рядом исследователей i, , i, вакуоль грибных и растительных клеток является основным компартментом литических ферментов, и выполняет функцию лизосомы этих клеток, аналогичную лизосомам животных клеток. На роль маркерного фермента вакуолей большинством авторов выдвигается оманнозидаза V i . i, i, i, . Для ЭТОГО фермента существует простая методика определения, он стабилен, кроме того, до последнего времени он был единственным маркером вакуолярной мембраны дрожжей V i . Фермент Объект исследова Кво фермента I 2 , i . . i . ДНКаза . . I ЛИСТЬЯ i 0 . i . ii эндосперм ii . . .