Сравнительный анализ экспрессии гена белка Fas в клетках человека при различных альтерирующих воздействиях на организм

• Автор: Уткин, Олег Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.04, 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 124 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие представления об апоптозе.

1.2. Структура протеина

1.3. Строение лиганда .

1.4. Регуляция альтернативного сплайсинга белка во время апоптоза

1.5. Механизмы реализации зависимого апоптоза.

1.5.1. Каспазы и механизм их действия.

1.5.2. Ингибиторы каспаз

1.5.3. Липидные рафты и опосредованный апоптоз

1.6. Общие представления о растворимых формах мембранных белков

1.7. Многообразие форм протеина
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1. Материалы исследования.
2.2. Реакция непрямой иммунофлуоресценции.
2.3. Получение козьих поликлональных антител, специфичных к поверхностным белкам мононукпеарных клеток крови человека
2.4. Перйодатный метод синтеза конъюгата
2.5. Получение образцов сыворотки крови.
2.6. Иммуноферментные методы определения растворимых форм мембранных белков клеток иммунной системы
2.7. Выделение РНК из клеток
2.8. Постановка реакции обратной транскрипции.
2.9. Постановка полимеразной цепной реакции.
2 Электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном геле
2 Постановка обратной транскрипцииполимеразной цепной реакции в реальном времени.
2 Методы статистического анализа
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Изучение экспрессии гена белка при вирусных гепатитах В и С
3.2. Исследование экспрессии гена белка при раке молочной железы.
3.3. Влияние ожоговой травмы на экспрессию гена протеина.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ЦИТИРОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА.
ВВЕДЕНИЕ


Результаты работы представлены на Российской научнопрактической конференции Узловые вопросы борьбы с инфекцией С. Новые технологии в профилактике, диагностике, эпиднадзоре и лечении инфекционных заболеваний, посвященной летию со дня рождения академика РАМН И. Н. Блохиной Нижний Новгород, , X Российском онкологическом конгрессе Москва, . По теме диссертации опубликовано печатных работ. Апробация диссертации состоялась на расширенном заседании кафедры молекулярной биологии и иммунологии ННГУ им. Н.И. И.Н. Блохиной и Нижегородского отделения Российского научного общества биохимиков и иммунологов апреля года. Диссертационная работа в объеме 4 листов состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитированной литературы. Диссертация иллюстрирована рисунками и таблицами. Библиографический указатель включает 9 источников литературы отечественных и 3 иностранных. Автор выражает глубокую признательность и благодарность к. ННИИТО М. Ю. Лебедеву, к. ННИИМБРЭ Д. В. Новикову за помощь при подготовке диссертационной работы всем сотрудникам кафедры молекулярной биологии и иммунологии, в особенности д. В физиологических условиях и при различных патологических состояниях регуляторным механизмом гомеостаза млекопитающих является апоптоз, или программированная гибель клеток . В настоящее время ясно, что программированная клеточная смерть является широко распространенным общебиологическим механизмом, ответственным за поддержание корректного числа клеток, формообразование и элиминацию дефектных популяций клеток. Апоптоз занимает ведущее место в эмбриогенезе и инволюции тканей, сохранении клеточного баланса в физиологических условиях, при удалении клеток с генетическими повреждениями, лучевых повреждениях, росте и терминальной дифференцировке , . Апоптоз может быть вовлечен в развитие целого ряда патологий. Предполагается, что опухолевый рост является результатом дисбаланса между пролиферацией клеток и программированной клеточной смертью , , . Ослабление апоптоза вследствие утраты рецепторов и факторов, участвующих в реализации сигналов к его развитию, определяют повышенную склонность к формированию аутоиммунных процессов. Усиление программы гибели клеток часто обусловливает заболевания, связанные с развитием атрофических процессов в нервной, мышечной, эндокринной тканях Никонова и др. Процесс апоптоза может быть структурно разделен на четыре независимые фазы инициацию, эффекторную фазу, деградацию и фазу очистки Рыжов, Новиков, . В качестве индукторов апоптоза могут выступать белковые продукты протоонкогенов, лиганды мембранных рецепторов, цитотоксические лекарственные препараты. За инициацией следует эффекторная фаза, в ходе которой происходит активация каспазной системы клетки. В течение эффекторной фазы различные инициирующие пути конвертируются в один общий или несколько путей апоптоза. Вслед за эффекторной наступает фаза деградации клетки, характеризующаяся деструкцией клеточного материала. Фаза деградации является общей для всех инициирующих путей. На этом этапе наблюдаются нуклеазная, протеазная и липазная гиперактивности, что неизбежно ведет к дезинтеграции клеточных подсистем. Формирующиеся в результате сложных и многообразных процессов деградации апоптотические тельца покрыты мембраной, что устраняет возможность утечки агрессивной внутриклеточной среды в межклеточное пространство. Кроме того, в фазе деградации тканевая трансглутаминаза свободно проходит внутрь апоптотирующей клетки и формирует сшивки между белками с образованием протеиновой сети, фиксирующей клеточное содержимое. В финальной фазе апоптоза фазе очистки умирающая клетка поглощается макрофагами, что обеспечивает отсутствие воспалительных реакций, связанных с выбросом в межклеточное пространство продуктов деградации. В физиологических условиях и при заболеваниях разного генеза активное участие в инициации апоптотической программы гибели принимает участие рецепторнолигандная система .