Совместное регулирование ранних стадий развития Т-лимфоцитов транскрипционными факторами Egr1 и NFATc1

• Автор: Кольцова, Екатерина Константиновна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 138 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СОДЕГКДНИ Е

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ. .

П0Р ЛИТЕРАТУРЫ .

Этапы развития Тлимфоцитов.

ар и уб Тлимфоци гы.

ПРЕТКЛ СТОЧНЫЙ I И ЕГОРОЛЬВ РЫУЛЯЦИИ РСЕЛСКЦИИ

РСЕЛЕКЦИЯ.

ТКЛЕТОЧ1ЫЙ РЬЦН ГГОР .

ТР.АИСКРИПЦИОНАЯ РЕГУЛЯЦИЯ РАЗВИТИЯ ТЛИМФОЦИТОВ.

АТА3

i.
Семейство регуляторных белков Ебелки, Iьелки
Ii .
Роль в развитии Тлимфоцитов.
Семейство бел ков.
2.
СЕМЕЙСТВО БЕЛКОВ
Кооперативная регуляция экспрессии генов несколькими транскрипционными факторами
ЦЕЛИ II ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
I1 I РИАЛЫ II МЕТОДЫ .
Клеточные культуры.
Животные модели мыши.
I ИЛИЧ1Г кое типировапие мышей
Методы молекулярного клонирования
Плазмиды.
ЧЩУКЦИЯ И РАИСДУКШЯ РЕГЮВИРУСОВ.
Проточная цитофлуриметрияРАС5.
ВЫД1Ж1 т гнк и измерении ЭКСПРЕССИИ ГК1 юв.
ПГ и РИАЛЫ ЮМ ВРЕМЕНИ.
Выделение эмбриональной ничьи и.
ВЫДЕЛЕНИЕ 1 ЬМАТОПОЭТИЧИСКИХ КЛСТОКРЕДШЕСПЗИННИКОВ И ВЫРАЩИВАНИЕ ЗРЕЛЫХ ЛИМФОЦИТОВ П КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК 9.
Приготовление ядсрных и цитоплазматических экстрактов.
ЭЛЕКТ1ОФОРЕЗ по Лэммли в денатурирующих условиях и вестернблоттинг
ПРИ.ИПИГА 1ИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВИЛКА 1, слитого с
Стимуляция клеточной линии форболовым эфиром и иопомицином. приготовление КЛЕТОЧНЫХ ЛИЗАТОВ И ИММУИОПРЕЦИПИТАЦИЯ
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Ингибирование КАЛЫ1ИНГЙРИ1ЮВОГОСИП1ЛЛЫЮГО пути полностью блокирует диффнрннцировку Т
клиток, но практически не влияет НА ЭКСПРЕССИЮ 1.
Ек I И СОВМЕСТНО регулируют диффирннцировку i.iiтимомы i vi.
I и I СОВМЕСТНО регулируют развитие первичных тлимфоцитов
ТРАПСКРИПЦИОИНЫЕ ФАКТОРЫ 1 И I ФОРМИРУЮТ КОМПЛЕКС ПРИ рСНЛЕКЦИИ
Для КЮПЕРАТИВ1 ЮГО ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С 1 НЕОБХОДИМЫ АКТИВАЦИОННЫЙ И ДМКСВЯЭЫВАЮЩИЙ
ДОМЕНЫ
Необходимо ли присутствие для стимуляции развития Тлимфоцитов, опосредова того I
I И С0ВМЕСТ1Ю РЕГУЛИРУЮТ ЭКСПРЕССИЮ ГЕНОВ.
Гги 1оЗ необходим для Iопосрпдованной диффьркнцировки Тлимфоцитов
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Белки экспрессируются многими типами клеток и регулируют разнообразные функции во многих тинах клеток. В частности, они активируются в ответ на сигнал от ргеТСЯ и играют важную роль в процессе регуляции случайной перестройки гена ацепи ТСИ. Несмотря на большое количество исследований функций Пгбелков в развитии Тлимфоцитов, остается неясным, каким образом белки этого семейства взаимодействуют с другими регуляторами экспрессии генов. Белки семейства ИБАТ также являются транскрипционными факторами, которые активируются в ответ на сигналы от ргеТСЯ и необходимы для прохождения селекции 5, , . Недавние исследования показали, что Е1 и ИРАТбелки могут совместно регулировать экспрессию различных генов. Как Ег1, так и ЫРАТс1 экспрессируются на ранних стадиях развития Тлимфоцитов. Экспрессия ргеТСК приводит к активации сигнальных каскадов, важными компонентами которых являются Ег1 и АТс1. Мы предположили, что взаимодействует с ЫРАТс1 и они совместно регулируют ранние этапы дифферепцировки Глимфоцитов. Маша работа посвящена изучению механизмов регуляции Рселекции Тлимфоцитов. В настоящий момент данные о возможном кооперативном взаимодействии этих транскрипционных факторов при прохождении рселекции отсутствуют. Мы считаем, что наше исследование актуально и необходимо для понимания молекулярных механизмов, контролирующих первую ключевую точку развития Тлимфоцитов. Полученные знания могут найти практическое применение при разработке профилактических или терапевтических подходов к лечению различных злокачественных заболеваний крови, аутоиммунных заболеваний и им. Разпитие Тлимфоцитов в иммунной системе позвоночных животных представляет собой важный и непрерывный процесс. Предшественники Тклеток образуются в костном мозге из мультипотентных стволовых клеток и мигрируют в тимус, где происходит их развитие и созревание. Тимус является местом развития Тлимфоцитов как в процессе эмбриогенеза, так и во взрослом организме. Клеткипредшественники, мигрирующие из костного мозга, мультииотентны. Они могут дифференцироваться как в Тлимфоциты, так и в дендритные клетки ОС или натуральные киллеры Ь1К . По мере дифференцировки в тимусе предшественники Тклеток теряют свою мультипотентость и становятся узко специализированными. Это происходит благодаря специфичной репрессии генов, необходимых для развития ЭС и ЫК, и усилению экспрессии генов, специфичных для зрелых Тклеток . В тимусе Тлимфоциты проходят через несколько стадий развития, выделяемых по экспрессии поверхностных маркеров С5 и С4, а также экспрессии кореценторов С или С. и одиночные позитивные клетки , составляющие около и , соответственно рис. 8 3 Го. Рис. Гистограмма типичного распределения Тклеток тимуса, находящихся на разных стадиях разви тия. На рисунке 2 представлена схема развития Тлимфошпов. Первой стадией развития Тклсток в тимусе является стадия I. Затем тимоциты последовательно дифференцируются, проходя от стадии I к стадии IV рис. Среди двойных негативных клеток можно выделить четыре субпопуляции, различающиеся по экспрессии поверхностных молекул и I фенотип II фенотип III фенотип и IV фенотип 1. Клетки IV развиваются затем в двойные позитивные Тклетки , которые экспрессируют оба корецептора 4 и 8. . Завершающим этапом развития является образование одиночных позитивных клеток, экспрессирующих наряду с корецепторы или С, или 8. Рис. Схема развития ар Тлимфоцитов в тимусе. Переход от одной стадии развития Тлимфоцитов к другой сопровождается изменением экспрессии генов. Так, при переходе от стадии ОЫ1 к стадии ОКИ усиливается синтез мРНК молекулы С5 рецептора интерлейкипа2, 1Ь2, вследствие чего увеличивается его поверхностная экспрессия. Таким образом клетка приобретает способность связывать 1Ь2 и пролиферировать в ответ на его присутствие в среде. Кроме того, происходит усиление экспрессии различных транскрипционных факторов, например, ОАТАЗ.