Сравнительные исследования структуры иммуноглобулинов класса G животных различных видов (свиньи, мыши, кролика) методами микрокалориметрии и дифференциальной спектрофотометрии

• Автор: Лосева, Ольга Игоревна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Оболенск
• Количество страниц: 117 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ . 5

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Структурные основы биологических функций иммуноглобулинов.

1.1. Структура иммуноглобулинов . 9

1.2. Механизмы активации эффекторных функций

антител .

1.3. Сегментальная гибкость иммуноглобулинов .

1.4. Влияние шарнирного участка на свойства

молекул иммуноглобулинов .

1.5. Влияние антигенов на пространственную

структуру иммуноглобулинов .
1.6. Система кроличьих антиполисахаридных 1с антител . 2
1.7. Антитела как аллостерические белки .
1.8. Конформационные изменения антител в результате связывания антигенов .
1.9. Механизмы активации системы комплемента
1Заключение и общая постановка задачи
исследования
ГЛАВА2. ЭКСПЕРШЕНТАЛБНАЯ ЧАСТЬ.
2.1. Материалы и методы исследования .
2.2, Результаты исследований
2.2.1.Температурнопертурбационная дифференциальная спектрофотометрия свиных антиДНФ Iдй антител
2.2.2.Сольвентнопертурбационная дифференциальная спектрофотометрия свиных антиДНФ антител
2.2.3. Исследование конформации свиных антиДНФ
i антител методом дифференциальной сканирующей микрокалориметрии .
2.2.4. Дифференциальная сканирующая микрокалориметрия анти I антител кролика
2.2.5. Температурнопертурбационная дифференциальная спектрофотометрия мышиных моноклональных антиДНФ ii антител
ГЛАВА 3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
3.1 Структура ранних преципитирующих и поздних непреципитирующих СВИНЫХ антиДНФ I антител .
3.2. Изменение конформации антител при взаимодействии с антигеном .гаптеном
3.3. Структура мышиных моноклональных антиДНФ антител
3.4. Использование иммуноглобулинов свиней
в аффинных сорбентах
ВЫВОДЫ .
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Первыми после иммунизации синтезируются антитела класса ,затем антитела класса о ,причем на смену низкоаффинным антителам образуются антитела высокоаффинные. Антитела, выделенные на ранних стадиях иммунного ответа,являются типичными преципитинами. Антитела,образующиеся на более поздних стадиях иммунного ответа,несмотря на высокую константу ассоциации,образуют растворимые комплексы с мультивалентными антигенами. Кроме того,ранние и поздние антитела обладают различной устойчивостью к протеолизу. Структурная основа различных функциональных свойств ранних преципитирующих и поздних непреципитирующих свиных антидинитрофенильных антител до настоящего времени не была известна. В то же время феномен переключения типов подклассов иммуноглобулинов б может играть важную роль в адекватности иммунного ответа. В связи с этим нами поставлены следующие цель и задачи исследования. Нель работы изучение конформационных изменений,индуцированных связыванием антигенов,в молекулах антител,имеющих различную структуру и выделенных из животных разных видов. Выявить конформационные различия моноклональных мышиных антидинитрофенильных антител,продуцируемых двумя различными гибридомами и принадлежащих к I подклассу иммуноглобулинов с . На основании проведенных исследований структуры иммуноглобулинов а свиньи дать рекомендации по их использованию для синтеза аффинного сорбента,применяемого для выделения белка А стафилококков. Научная новизна. Получены данные,свидетельствующие о том, что конформационные изменения,индуцированные связыванием антигена, не ограничиваются антигенсвязывающими центрами,а захватывают всю молекулу антител. Впервые показано,что конформационные изменения, обусловленные связыванием антигена,зависят от типа подкласса иммуноглобулинов и структуры вариабельных доменов. Получены данные о различной структуре двух типов свиных антидинитрофенильных антител,ранних прециштирующих и поздних непреципитирующих,подтверждающие предположение о том,что эти антитела являются подклассами свиных иммуноглобулинов о . Ранние антитела характеризуются большей стабильностью взаимодействия между Сн2 и Сн3 доменамичем поздние антитела,что объясняет. .В то же время ранние антитела имеют меньшую жесткость структуры других частей молекулы по отношению к температурной пертурбации. Конформационные изменения,индуцированные гаптеном, больше для ранних прециштирующих антител. Показано,что структура вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей в мышиных моноклональных антидинитрофенильных антителах, принадлежащих к одному подклассу 1еС1 и имеющих тип легкой цепи,существенно влияет на конформационную лабильность молекулы антитела по отношению к температурной пертурбации и связыванию антигена. Практическая ценность. Данные о конформационных свойствах иммуноглобулинов й свиньи использованы при создании иммуносорбента,обладающего повышенной устойчивостью к действию протеаз при кислых значениях . Кроме того,этот сорбент более экономичный по сравнению с иммуносорбентом на основе о человека. На основе иммуносорбента,содержащего в качестве иммобилизованного белка свиньи,разработан лабораторный регламент получения белка А стафилококков и налажено производство опытных партий белка А на базе НИКТИ биологическиактивных веществ г. Новосибирск ,что позволило в течение гг. ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Структурные основы биологических функций иммуноглобулинов. Структура иммуноглобулинов. Иммуноглобулины это сывороточные гликопротеины,которые синтезируются и секретируются В лимфоцитами как антитела против различных антигенов. Антигены чужеродные вещества или измененные в результате мутационных и других повреждений собственные молекулы и клетки. В сыворотке присутствует 5 классов иммуноглобулинов б ,М,А,Д,Е ,среди которых наиболее распространенный и изученный класс иммуноглобулинов б ,,, 1,2 . На Рис. Рис. Эти белки состоят из двух полипептидных цепей,называемых тяжелыми н цепями,молекулярный вес которых0, и двух легких ь цепей с молекулярным весом 0.