Иммуноферментный анализ естественных антител к биогенным аминам и опиоидным пептидам в сыворотке крови человека

• Автор: Петроченко, Светлана Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений.

Введение

1. Обзор литературы. Естественные антитела к физиологически активным

соединениям

1.1. Общая характеристика естественных антител.

1.2. Иммунохимичсские свойства естественных антител

1.3. Физиологическая роль естественных антител.

1.4. Естественные антитела к низкомолекулярным соединениям.

1.5. Взаимосвязь между естественными антителами и аутоантителами при патологии

2. Материалы и методы

2.1. Материалы исследований
2.2. Методы исследований.
2.3. Получение синтетических антигенов к опиоидным пептидам и биогенным аминам на полимерном носителе
2.3.1. Получение конъюгата Зэндорфина на основе полимерной матрицы.
2.3.2. Получение конъюгата дерморфина на основе полимерной матрицы.
2.3.3. Получение конъюгата серотонина на основе полимерной матрицы.
2.3.4. Получение конъюгата гистамина на основе полимерной матрицы
2.3.5. Получение конъюгата дофамина на основе полимерной матрицы.
2.4. Разработка иммуноферментного анализа для определения антител к опиоидным пептидам и биогенным аминам
2.4.1. Определение рабочего разведения анализируемой сыворотки и концентрации антигена, сорбируемого на планшете.
2.5. ИФА определения антител к опиоидным пептидам и биогенным аминам в сыворотке крови человека.
2.5.1. ИФЛ определения антител к рондорфину в сыворотке крови человека
2.5.2. ИФЛ определения антител к дерморфииу и его аналогам в сыворотке крови человека.
2.5.3. ИФЛ определения антител к серотонину в сыворотке крови человека.
2.5.4. ИФА определения антител к гистамину в сыворотке крови человека
2.5.5. ИФЛ определения антител к дофамину в сыворотке крови человека.
2.6. Выделение антител к огшоидным пептидам и биогенным аминам из сыворотки крови
человека.
2.6.1 Получение сорбента для аффинной хроматографии антител к дерморфину.
2.6.2. Получение сорбента для аффинной хроматографии антител к рэндорфину.
2.6.3. Получение сорбента .тля аффинной хроматографии антител к гистамину
2.6.4. Получение сорбента .тля аффинной хроматографии антител к серотонину.
2.6.5. Получение сорбента для аффинной хроматографии антител к дофамину
2.6.6. Выделение антител к рэндорфнну аффинной хроматографией.
2.6.7. Выделение антител к дерморфину аффинной хроматографией
2.6.8. Выделение антител к гистамину аффинной хроматографией.
2.6.9. Выделение антител к серотонину аффинной хроматографией
2.6 Выделение антител к дофамину аффинной хроматографией.
2.7. Изучение иммунохимических свойств антител к опиоидиым пептидам и биогенным аминам.
2.7.1. Выбор условий проведения ингибиторного ИФА
2 Ингибиторный ИФА для оценки специфичности и аффинности антител к опиоидным пептидам и биогенным аминам
2.7.3. Определение специфичности антител к олиоидным пептидам и
биогенным аминам.
2.7.4. Расчт константы аффинности антител к опиоидным пептидам и
биогенным аминам.
3. Обсуждение результатов.
3.1. Получение реагентов для разработки иммуноферментного анализа определения антител к биогенным аминам и опиоидным пептидам
3.1.1. Синтез конъюгированных антигенов к биогенным аминам и опиоидным пептидам на полимерной матрице.
3.2. Разработка метода иммуноферментного анализа определения антител к биогенным аминам и опиоидиым пептидам в сыворотке крови человека.
3.2.1. Определение антител к биогенным аминам и опиоидным пептидам в сыворотке крови человека методом иммуноферментного анализа.
3.3. Выделение аффинной хроматографией естественных антител к биогенным аминам, опиоидным пептидам и исследование их свойств.
3.3.1. Исследование иммунохимических свойств естественных антител к р
эидорфину, дерморфину, серотонину, дофамину и гистамину
3.4. Исследование иммунохимических свойств антител к 3эндорфину, дерморфину, выделенных из сыворотки крови доноров и больных наркоманией
3.6. Сравнительное определение с помощью НФА уровня естественных антител к биогенным аминам в сыворотке крови больных наркоманией и доноров.
3.7. Сравнительное определение с помощью ИФА уровня естественных антител против опиомдных пептидов в сыворотке крови больных наркоманией, нейродермитом и доноров
3.8. Сравнительный анализ изменения уровня антител к биогенным аминам и опиоидным пептидам в норме и при заболеваниях зависимости
3.9. Диагностическая значимость выявления антител к наркотикам, биогенным аминам,
опиоидным пептидам у больных наркоманией.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Актуальна задача разработки наджных методов контроля за состоянием здоровья человека. Определение специфических иммунных изменений, сопровождающих развитие указанных патологических процессов, поможет выявить новые маркеры, отражающие как начальные стадии, гак и последующее течение заболевания, для дифференцированной системы комплексной диагностики, лечения и реабилитации больных. Цель исследования. Целью данного исследования является разработка методов определения естественных антител к опиопдным пептидам и биогенным аминам на основе твердофазного иммупофермептного анализа, изучение их специфических биохимических свойств и сравнительное определение изменения их уровня в норме и при развитии патологических процессов. Разработать методы получения биохимических реагентов синтетических антигенов рэндорфнна, дерморфина. Синтезировать сорбенты для аффинной хроматографии, провести выделение антител к опиоидным пептидам и биогенным аминам из сыворотки крови человека, исследовать биохимические свойства антител аффинность и специфичность. Провести сравнительный анализ содержания специфических антител к опиоидным пептидам и биогенным аминам в сыворотке крови человека и установит практическую значимость разработанных вариантов иммуноферментного анализа. Научная новизна. Созданы новые способы получения кошлоппов опиоидных пептидов рэндорфина и дерморфина и биогенных аминов дофамина, серотонина и гистамина с использованием 1юли4иитрофенил акрилата. Разработаны оригинальные методы твердофазного иммуноферментного анализа ИФА для определения естественных антител к опиоидным пептидам рэндорфину и дерморфину в сыворотке крови человека. На основе их применения для исследования сыворотки крови доноров и больных обнаружены антитела к указанным нейромедиаторам. Причм, установлено изменение уровня антител к Рэндорфину и дерморфину по сравнению с нормой, в случае возникновения в организме человека процессов, связанных с проявлением клиники патологического влечения к употреблению наркотических веществ, алкоголю, азартным играм. Синтезированы новые сорбенты для аффинной хроматографии из сыворогкн крови человека выделены антитела к опиоидиым пептидам рэидорфииу и дерморфину и биогенным аминам дофамину, серотонину и гистамину. Исследованы биохимические свойства аффинно очищенных антител. Измерена константа аффинности и специфичность. Установлена взаимосвязь между структурой дерморфина, его биологической активностью и специфичностью естественных антител. Научнопрактическая значимость работы. Показана возможность использования новых методов иммуноферментного анализа определения естественных антител к биогенным аминам и опиоидным пептидам в практической медицине. Проведнное сравнительное определение содержания естественных антител к рэндорфину, дерморфину, дофамину, серотонину и гистамину позволило выявить их достоверное увеличение к указанным выше соединениям при наркомании и снижение их уровня при нейродермите и поллииозе. Найдена взаимосвязь между уровнем естественных антител к исследованным биорегуляторам в сыворотке крови больных и течением заболевания зависимости наркомания, алкоголизм, игромаиия. Установлено, что определение естественных антител к гистамину при нейродермите и поллииозе может использоваться для оценки эффективности проводимой терапии. Разработанные способы анализа используются с года в Московском научнопрактическом центре наркологии, Госпитале ФСБ России, а также ряде наркологических клиник страны. Основные положения, выносимые на защиту. Метод иммуноферментного анализа естественных антител к биогенным аминам и опиоидным пептидам в сыворотке крови человека на основе полученных синтетических антигенов Зэндорфипа, дерморфина, дофамина, серотонина и гистамина. Исследование биохимических свойств естественных антител к опиоидным пептидам и биогенным аминам, сравнительная оценка изменения их аффинности и специфичности в норме и при патологии. Сравнительный анализ антител к опиоидным пептидам и биогенным аминам в норме и при патологии. Определение практической значимости разработанных вариантов иммуноферментного анализа.