Физико-химические и биологические свойства препаратов иммуноглобулинов при разных способах удаления и инактивации вирусов

• Автор: Зубкова, Наталия Васильевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 126 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Обеспечение вирусной безопасности сырья, используемого

для изготовления иммуноглобулинов

1.2. Методы получения иммуноглобулинов и вирусная безопасность препаратов.

1.3. Дополнительные технологические приемы инактивации вирусов

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1.МАТЕРИАЛ Ы

2.1.1. Получение иммуноглобулина в

2.1.2. Приготовление раствора гидроокиси алюминия.

2.2. МЕТОДЫ.
2.2.1. Определение повреждений структуры 0.
2.2.1.1. Оптическая плотность растворов.
2.2.1.2. Молекулярный состав.
2.2.2. Определение изменений функциональной активности 1С
2.2.2.1. Изменения в области фрагмента.
Изменения в области РаЬфрагмента.
2.2.3. Оценка эффективности элиминации и инактивации
вирусов.
2.2.3.1. Метод полимеразной цепной реакции
2.2.3.2. Метод определения инфекционности вируссодержащего материала.
2.2.4. Определение примесей и ионного состава иммуноглобулинов
2.2.4.1. Определение состава методом иммуноэлектрофореза .
2.2А.2. Определение концентрации анионов и катионов.
2.2.4.3. Определение содержания ионов хлора СГ.
2.2.4.4. Определение удельного сопротивления растворов иммуноглобулина
2.2.5. Другие методы
2.2.5.1. Определение остаточного трибутилфосфата.
2.2.5.2. Статистическая обработка результатов
2.3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ .
2.3.1. Изучение влияния тепловой обработки на физикохимические и биологические свойства иммуноглобулинов
2.3.1.1.Прогрев препаратов в отсутствие стабилизаторов.
2.3.1.2. Прогрев раствора иммуноглобулина в
присутствии стабилизаторов.
2.3.1.3. Оценка вирусной безопасности иммуноглобулинов при тепловой обработке препарата.
2.3.2. Использование химических реагентов в технологии
производства иммуноглобулинов
2.3.2.1 .Сольвентдетергентный метод.
2.3.2.2. Изменение содержания нуклеиновых кислот после сольвентдетергентной обработки
2.3.2.3. Обработка иммуноглобулина неорганическими
адсорбентами.
2.3.2.4. Оценка эффективности элиминации вирусов адсорбентами
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Разработано несколько вариантов очистки иммуноглобулинов после сольвентдетергентной обработки. Установлено, что сольвентдетергентная обработка не изменяет физикохимические и биологические свойства препарата. Обосновано использование неорганических адсорбентов для удаления вирусов и оптимизированы условия обработки препарата. Показано, что при обработке раствора иммуноглобулина гелем гидроокиси алюминия можно достигнуть инактивации вирусов без изменения физикохимических и биологических свойств препарата. Научная новизна подтверждена патентом на Способ получения иммуноглобулинового препарата , приоритет от . В условиях производства получены и охарактеризованы три экспериментальные серии иммуноглобулина для внутривенного введения, изготовленные со стадией тепловой инактивации вирусов. В настоящее время исследуются изменения физикохимических и биологических свойств препарата в процессе длительного хранения. Стадия удаления вирусов с помощью неорганических адсорбентов включена в регламент производства иммуноглобулина человека нормального для внутривенного введения , согласованного с Государственным научноисследовательским институтом стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени Л. А.Тарасевича марта года. Основные параметры прогрева растворов иммуноглобулинов концентрация белка, солей, , температура и вид стабилизаторов, определяющие сохранность биохимических и биологических свойств иммуноглобулинов при тепловой инактивации вирусов. Уровень вирусной редукции при оптимальном режиме обработки. Сольвснтдстергентная обработка в сочетании с предложенными технологическими приемами удаления реагентов из раствора препарата не влияет на физикохимические и биологические свойства иммуноглобулина. Обработка препарата минеральным неспецифическим адсорбентом приводит к снижению концентрации вирусов, вместе с тем процесс адсорбции не оказывает влияния на структуру и функциональную активность иммуноглобулинов. По теме диссертации опубликовано работ. V Российском национальном конгрессе Человек и лекарство Москва г на конференции Производственная трансфузиология на рубеже XXI века Москва г на 8й и й Международной конференции СПИД, рак и родственные проблемы С. Диссертация изложена на 6 страницах машинописного теста, иллюстрирована таблицами и рисунками, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы, содержащего 9 источников, из которых 2 иностранные. Плазму, используемую для изготовления иммуноглобулинов, несмотря на комплекс мер, предупреждающих передачу инфекции, обычно рассматривают, как потенциальноинфекционный материал. Оценка риска и меры профилактики обязательное условие при заготовке плазмы. Ведущее место среди основных инфекционных агентов, которые потенциально могут присутствовать в плазме, занимают вирусы. Вероятность контаминации плазменных пулов зависит от целого ряда факторов 1 биологических особенностей вируса 2 концентрации титра вирусов 3 циркуляции вирусов в донорской популяции 4 эффективности лабораторных методов исследования крови на релевантные возбудители 5 качества диагностических систем, используемых для скрининга доноров i . Голосова Т. В. и др. Наиболее просто организованные вирусы представляют собой нуклеокапсиды они состоят только из нуклеиновой кислоты и белковой оболочки, построенной из идентичных пептидных молекул. Более сложно устроены вирусы, у которых имеется вторая оболочка суперкапсид, представляющая собой биологическую мембрану, состоящую из двух слоев липидов, имеющих клеточное происхождение, и заключенных в них гликолизированных вирусных белков, которые выступают над поверхностью вириона в виде своеобразных шипов Коротяев А. И., . Эпидемиологические данные свидетельствуют, что относительно небольшое число известных вирусов может быть передано с плазмой или сывороткой, которую используют для получения иммуноглобулина. К ним относятся вирус иммунодефицита человека I и II типов ВИЧ 1.