Особенности интеграции tet(M) детерминанты в геном M. hominis

• Автор: Сорока, Александр Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 с. : ил

Оглавление

Список сокращений Введение

1. Обзор литературы

1.1 Молликуты. Общая характеристика класса

1.2 Характеристика i и ii

1.2.1 i
1.2.2 ii
1.3 Антибактериальные препараты, используемые для лечения микоплазмозов и известные механизмы защиты
1.3.1 Основные группы антибактериальных агентов, используемых при лечении микоплазмозов

1.3.2 Антибиотикорсзистентность микоплазм

1.3.3 Транспорт

1.4 Конъюгагивные транспозоны бактерий
2. Материалы и методы
2.1 Бактериальные штаммы и вектора
2.2 Антибактериальные препараты
2.3 Культивирование .i, минипрепаративное выделение плазмидной ДНК
2.4 Культивирование М.ii Н
2.5 Культивирование . i
2.6 Определение минимальной ингибирующей концентрации МИК
2.7 Выделение в культуре клинических изолятов урогенитальных микоплазм
2.8 Выделение ДНК .ii, .i из клеточной ку льтуры
2.9 Выделение ДНК .ii и .i из клинических проб
2. Выделение ДНК .ii и .i из отдельных колоний
2. Рестрикция
2. гибридизация
2. Пульсэлектрофорез
2. Проведение полимеразной цепной реакции и определение нуклеотидной последовательности продуктов амплификации
2. Очистка ЦРпродукта
2. Клонирование ПЦРпродукта
2. Определение нуклеотидной последовательности
2. ПЦР
3. Результаты
3.1 Разработка и использование метода амплификации с произвольным цраймером для геиотипирования микоплазм
3.2 Определение генетической гетерогенности клинических изолятов
М.ii, выявленной при наблюдении за пациентами с
рецидивирующими воспалительными заболеваниями УГТ
3.3 Характеристика процессов формирования резистентности микоплазм и уреаплазм к тстрациклинам
3.4 Определение аллельного полиморфизма мозаичности еМ у клинических изолятов М.ii и .i
3.5 Анализ вторичной структуры пептидов, кодируемых разичньтми аллелями гена еМ .ii и .i
3.6 Интеграция гена в геном .ii и молекулярное картирование конъюгативного транспозона ТпРУб
4. Обсуждение
5. Заключение
6. Выводы
Список литературы


Геном ii, одного из представителей класса i составляет п. Важными особенностями молликут являются их распространенность как паразитов многоклеточных организмов и видоспецифичность по отношению к макроорганизмухозяину. Персистирование большинства видов микоплазм, в основном, происходит в организме хозяина 2. Микоплазмы при некоторых состояниях макроорганизма способны вызывать выраженные патологические изменения воспалительного характера, нередко осложненные аутоиммунными расстройствами 3. Известны эпидемические вспышки воспалительных инфекционных заболеваний, вызываемых микоплазмами, у сельскохозяйственных животных, птиц, растений, а также у человека 3. Наибольшее значение в клинике заболеваний человека имеют микоплазмозы с локализацией на слизистой респираторного и урогенитального трактов, которые характеризуются аутоиммунными осложнениями и хроническим течением 5, 6, 7. ii и i, колонизируя слизистые поверхности урогенитального тракта, ассоциированы с развитием сальпингитов, простатитов, уретритов, кольпитов, циститов 8, 9. Для лечения микоплазмозов применяют антибиотики широкого спектра действия. Это приводит к возрастанию уровня резистентности сопутствующей микрофлоры и длительному персистированию микоплазм с развитием осложнений , , . На сегодняшний день пакоплен противоречивый материал об индивидуальной устойчивости микоплазм к антибактериальным агентам. Применение этих антибактериальных агентов i viv, в условиях персистирования микоплазм, часто оказывается малоэффективным , , . Кроме того, показано наличие высокой нестабильности их генома, обусловленной разными механизмами , , . Такие противоречивые экспериментальные и медицинские данные четко обозначают одно из приоритетных направлений исследований микоплазм изучение фундаментальных, эпидемиологических и медицинских аспектов резистентности молликут к применяемым антибактериальным агентам. В настоящее время для лечения микоплазменной инфекции используются синтетические препараты, действующие на широкий спектр микроорганизмов , , . Дозы препаратов и их длительное применение для воздействия на молликут приводят к развитию побочных эффектов, к числу которых необходимо, прежде всего, отнести системный и местный дисбиоз. Отсюда следует, что изучение основных механизмов формирования резистентности микоплазм к антибактериальным агентам, применяемым для их эрадикапии из организма, в частности тетрацикл и нам, является актуальной задачей, подразумевающей фундаментальные и медицинские аспекты исследования. Целью данной работы являлось комплексное изучение основных последствий переноса еМ гена устойчивости к тетрациклинам в составе конъюгативного транспозона в клинических тетрациклинрезистентных изолятах ii и i. Разработка и использование метода амплификации с произвольным праймером для генотинирования микоплазм. Изучение закономерностей формирования тетрациклинзависимой резистентности в ходе лечения тетрациклинами больных с неспецифическими воспалительными заболеваниями урогенитального тракта состав вагинальной микрофлоры, концентрация iМ в вагинальном биоценозе. Выявление М детерминанты в тетрациклинустойчивых Тсг клинических изолятах М. .i. Изучение полиморфизма гена М в Те клинических изолятах М. .i. Молекулярное картирование транспозона Тп6, интегрированного в геном М. Доказательство интеграции гена М в геном М. Всероссийская медикобиологическая конференция молодых исследователей СанктПетербург, , 5я Путинская конференция молодых ученых Пущино, , IV Международной конференции МАКМАХ Антимикробная терапия Москва, , V Международной конференции МАКМАХ Антимикробная терапия Москва, . По материалам диссертации опубликовано 3 статьи Закономерности дрейфа детерминанты в урогенитальном микробиоценозе, содержащем микоплазмы, при действии антибактериального агента тетрациклинового ряда. А.Е. Тараскина, А.