Свойства и регуляция активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в условиях оксидативного стресса при токсическом поражении печени крыс

• Автор: Левенкова, Марина Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 180 с. : ил.

1.1. Виды гепатитов.

1.2. Свободнорадикальнос окисление и аитиоксидантные

системы защиты.

1.2.1. Свободные радикалы и пути их образования

1.2.2. Пероксидное окисление липидов и его роль

1.2.3. Участие свободнорадикальных процессов в жизнедеятельности

1.2.4. Активные формы кислорода, механизм их образования

и роль.

1.2.5. Роль свободнорадикального окисления в развитии патологии печени.

1.2.6. Понятие об антиоксидантной. системе защиты

1.2.6.1. Ферментативные антиоксиданты

1.2.6.2. Неферментативная антиоксидантная система
1.2.6.3. Белки теплового шока
1.3. Механизм токсического действия четыреххлористого
углерода
1.4. Характеристика глюкозо6фосфатдегидрогеназы из различных организмов
1.4.1. Реакция, катализируемая ферментом.
1.4.2.Физиологическая роль глюкозо6фосфатдегидрогеназы
1.4.3. Изоформы и внутриклеточная локализация глюкозо6фосфатдегидрогеназы
1.4.4. Очистка глюкозо6фосфатдегидрогеназы из
различных источников
1.4.5. Молекулярная масса и субъединичная структура
1.4.6. Идентификация функциональных групп активного
центра глюкозо6фосфатдсгидрогсназы
1.4.7. Влияние среды и температуры на активность глюкозо6фосфатдегидрогеназы.
1.4.8. Кинетическое поведение и регуляция активности глюкозо6фосфатдегидрогеназы.
1.4.8.1. Сродство к субстрату и кофакторам
1.4.8.2. Регуляция активности фермента
1.4.8.2.1. Активаторы глюкозо
фосфатдегидрогеназы.
1.4.8.2.2. Ингибиторы активности глюкозо6фосфатдегидрогеназы.
1.4.8.2.3. Особенности функционирования глюкозо6фосфатдегидрогеназы при различных патологических состояниях
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования
2.1. Объект исследования.
2.2. Создание модели экспериментального токсического
гепатита.
2.3. Получение субклеточных фракций гепатоцитов
2.4. Определение интенсивности процессов СРО методом биохемилюминесценции.
2.5. Определение содержания малонового диальдегида.
2.6. Определение содержания диеновых конъюгатов
2.7. Определение активности ферментов
2.8. Определение количества белка
. 2.9. Выделение и очистка фермента.
2.9.1. Экстракция
2.9.2. Фракционирование белков с помощью сульфата
аммония
2.9.3. Гельфильтрация.
2.9.4. Ионообменная хроматография на ДЭАЭцеллюлозе
2 Исследование кинетических характеристик и регуляции активности фермента.
2 Аналитический электрофорез
2 Определение молекулярной массы
2 Статистическая обработка экспериментальных данных
ГЛАВА 3. Оценка интенсивности свободнорадикальных процессов и активности глюкозо6фосфатдегидрогеназы в динамике развития экспериментального токсического гепатита
3.1. Параметры биохемилюминесценции в печени крыс в
динамике развития токсического гепатита
3.2. Определение содержания первичных и вторичных
продуктов пероксидного окисления липидов.
3.3. Активность глюкозо6фосфатдегидрогеназы в динамике развития токсического гепатита.
ГЛАВА 4. Кинетические и реляторные свойства глюкозо6фосфатдегидрогсназы из печени крыс в норме и при экспериментальном токсическом гепатите
4.1. Исследование субклеточной локализации глюкозо
фосфатдегидрогеназы.
4.2. Очистка глюкозо6фосфатдегидрогеназы из печени контрольных и подвергнутых токсическому гепатиту крыс
4.3. Исследование кинетических параметров каталитического действия глюкозо6фосфатдегидрогеназы из печени крыс в
норме и при экспериментальном токсическом гепатите.
4.4. Молекулярная масса глюкозо6фосфатдегидрогеназы
4.5. Влияние концентрации ионов водорода на активность глюкозо6фосфатдегидрогеназы из печени крыс в норме и при экспериментальном токсическом гепатите
4.6. Регуляторные свойства глюкозо6фосфатдегидрогеназы из печени крыс в норме и при патологии
4.6.1. Участие ионов некоторых металлов регуляции активности глюкозо6фосфатдегидрогеназы
4.6.1.1. Роль ионов 2 и Мп2 в регуляции активности глюкозо6фосфатдегидрогеназы в норме и при токсическом гепатите.
4.6.1.2. Влияние ионов Бе2, Си2, Са2 на активность глюкозо6фосфатдегидрогеназы
4.6.2. Влияние пероксида водорода на функционирование глюкозо6фосфатдегидрогеназы в норме и при патологии .
4.6.3. Участие глутатиона в регуляции активности глюкозо6 фосфатдегидрогеназы в норме и при токсическом гепатите .
4.6.4. Регуляция активности глюкозо6фосфатдегидрогеназы адениннуклеотидами и НАДФН
4.6.5. Особенности регуляции активности глюкозо6фосфатдегидрогеназы под действием интермедиатов цикла Кребса при экспериментальном токсическом гепатите
4.6.6. Участие интермедиатов углеводного обмена в
регуляции активности глюкозо6фосфатдегидрогеназы
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Гепатит В ii В широко распространенная инфекция человека, вызываемая вирусом гепатита В, в клинически выраженных случаях характеризуется симптомами острого поражения печени и интоксикации, отличается многообразием клинических проявлений и исходов заболевания. Заражение вирусом гепатита В происходит при непосредственном попадании вируса в кровь при парентеральных вмешательствах или при гемотрансфузиях или через слизистые оболочки, повреждения кожного покрова при половых контактах, вертикальной передаче, тесном бытовом контакте. При гепатите В происходит преимущественное поражение центральных отделов долек печени, дистрофия и некроз гепатоцитов, причем поражение гепатоцитов связано не с непосредственным цитопатогенным действием вируса, а с иммунопатологическими процессами. Значительную роль в развитии патологических процессов, происходящих при гепатите В, играют аутоиммунные реакции, т. При этом происходит разрушение не только зараженных, но и незараженных гепатоцитов. Патогистологически острый гепатит В характеризуется диффузным поражением ткани печени, затрагивающим паренхиму и мезенхиму, а также
внутрипеченочные желчные пути. Аналогично морфологическим изменениям при гепатите А, регистрируются гепатоциты, находящиеся на различных фазах дистрофии, ведущей к некрозу. Гепатит С ii С это инфекционное заболевание печени, вызываемое вирусом. Инфекция, обусловленная вирусом гепатита С , может развиться у любого человека и наблюдается чаще у молодых людей. Основной механизм инфицирования гематогенный, парентеральный через кровь. Большинство случаев гепатита С развивается незаметно и переходит в хроническую форму с многолетним течением без симптомов , . Токсические гепатиты xi ii гепатиты, вызванные действием любых химических веществ, включая лекарства лекарственный гепатит и алкоголь алкогольный гепатит. Разнообразные химические вещества могут вызвать как острое, так и хроническое поражение печени, причем часть веществ например, дихлорэтан, четыреххлористый углерод, хлороформ и другие оказывает преимущественно непосредственное гепатотоксическое действие, в то время как другие вещества например, уксусная кислота, мышьяк, медный купорос опосредованно влияют на функционирование гепатоцитов, нарушая их гомеостаз. К настоящему времени установлено, что большое количество биохимических реакций в организме протекает при участии свободных радикалов, обладающих исключительно высокой химической активностью . Свободными радикалами называют молекулы или структурные фрагменты молекул, имеющие на внешней орбитали неспаренный электрон. Поскольку для устойчивого состояния молекула должна содержать на наружной орбитали два электрона, СР активно стремятся отнять
недостающий электрон от других молекул, что придает им повышенную реакционную способность. Существуют три типа образования СР первичное инициирование, обусловленное внешними воздействиями, вторичное, связанное со свободнорадикальным окислением СРО жирных кислот фосфолипидов клеточных мембран, и ферментативное инициирование . Основными мишенями СР являются ненасыщенные связи в липидах мембран 8. Свободные радикалы, играющие наибольшую роль в живой клетке, это радикалы кислорода, ненасыщенных жирных кислот в составе липидов и фенольных производных, таких как убихинон, флавин и токоферол . Классическим примером СР процессов в организме является пероксидное окисление липидов ПОЛ, протекающее преимущественно в биологических мембранах. Полиненасыщенные жирные кислоты, входящие в состав мембран, это основные субстраты процессов ПОЛ. ПОЛ макроскопический процесс, протекающий во всех типах мембран и играющий огромную роль в регуляции клеточного метаболизма в норме и при действии повреждающих факторов. Процесс ПОЛ тесно связан с метаболизмом компонентов клетки, в том числе с обновлением состава фосфолипидов 8, 7. Если принять во внимание интенсивность дыхания, ведущего к увеличению обогащения кислородом всех клеток при стрессе, можно прийти к однозначному заключению, что стрессреакция, особенно в ее начальных стадиях, является материальным и фундаментальным инициатором повышения интенсивности ПОЛ . Пероксидация липидов протекает по принципу цепной реакции, идущей в несколько этапов зарождение цепей, развитие цепных реакций и обрыв цепей , , , .