Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Черепанова, Екатерина Александровна
03.00.04
Кандидатская
2005
Уфа
114 с. : ил.
Стоимость:
499 руб.
.) ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. РОЛЬ ПЕРОКСИДАЗЫ В ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТИ РАСТЕНИЙ
(обзор литературы)
1Л. Распространенность фермента пероксидазы, история его изучения и практическое значение
■f ,
1.2. Строение и свойства растительной пероксидазы
1.2.1. Структура и физико-химические свойства
9 '•
1.2.2. Реакции, катализируемые пероксидазой
1.3. Физиологические функции растительной пероксидазы
1.3.1. Полифункциональность растительных пероксидаз
1.3.2. Физиологические функции отдельных изопероксидаз в растениях
1.3.3. Функции пероксидаз, связанные с защитными реакциями растений
на инфицирование патогенами
1.4. Биополимеры, входящие в состав клеточных стенок фитопатогенов и
взаимодействие растительных пероксидаз с ними
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Объекты исследований
2.2. Постановка опытов
о ■ 2.3. Получение ферментных экстрактов свободной, ионно- и ковалентносвязанной с клеточными стенками фракций пероксидазы, атак же её внеклеточных форм
2.4. Подготовка хроматографических матриц
^ 2.5. Выделение пероксидаз, способных сорбироваться на хитин
2.6. Определение активности ферментов
2.7. Колориметрический метод определения белка по Bradford
2.8. Методы электрофореза белков
2.9. Иммунологические методы
2.9.1. Получение поликлональных антипероксидазных антител
2.9.2. Двойная иммунодиффузия в агарозном геле
^ 2.9.3. Определение концентрации анионной пероксидазы методом
непрямого твердофазного конкурентного иммуноферментного анализа
2.9.4. Вестерн-блоттинг
2.10. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
* 3.1. Сорбция пероксидаз на клеточные стенки фитопатогенных грибов и
ризобиальных бактерий
7 '
3.1.1. Взаимодействие пероксидаз пшеницы с хитин-глюкановым комплексом клеточных стенок фитопатогенных грибов
3.1.2. Взаимодействие пероксидаз из корней козлятника восточного с клеточными стенками ризобиальных бактерий
3.2. Выделение гомогенного препарата хитин-специфичной пероксидазы пшеницы и изучение её свойств
3.2.1. Исследование механизмов сорбции пероксидазы пшеницы на хитин
3.2.2. Локализация хитин-специфичной пероксидазы в растениях
пшеницы
3.2.3. Получение гомогенного препарата анионной пероксидазы пшеницы
3.2.4. Характеристика хитин-специфичных белков пшеницы
3.2.5. Иммуноспецифичность антител, полученных против анионной пероксидазы и хитин-специфичных белков пшеницы
3.3. Взаимодействие пероксидаз различных видов растений с хитином
3.3.1. Влияние хитина на активность пероксидазы в белковых экстрактах
из различных видов растений
/I 3.3.2. Изоферментный состав пероксидаз разных видов растений
3.3.3.Исследование иммунохимического сходства пероксидаз разных
видов с хитин-специфичными белками пшеницы
3.4. Влияние хитоолигосахаридов, салициловой кислоты и освещения на устойчивость каллусов пшеницы к возбудителю твердой головни
3.4.1. Изменение активности и изоферментного спектра пероксидазы в совместных культурах каллусов Т. aestivum с грибом Т. caries под влиянием хитоолигосахаридов
3.4.2. Влияние салициловой кислоты на активность пероксидазы в совместных культурах каллусов Т. aestivum с Т. caries
3.4.3. Влияние освещенности на активность пероксидазы пшеницы в
совместных культурах каллусов Т. urartu и Т. caries
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
значительную роль играют специфичные участки в белковой молекуле, связанные с преимущественным взаимодействием с ацетильными остатками хитина, а не с зарядом фермента. Это свойство анионной пероксидазы пшеницы позволило назвать её хитин-специфичной изоформой.
Основываясь на способности анионной пероксидазы сорбироваться на
высоко ацетилированный хитин, мы предположили, что она будет активно
связываться и с другим полимером, содержащим ацетильные группы,
например, с ацетилцеллюлозой. Для выявления сорбции пероксидазы на
целлюлозу и ацетилцеллюлозу на поверхность ацетилцеллюлозных («Тасма»,
Россия) и целлюлозных («ЬКВ», Швеция) фильтров наносили по 3 мкл
образцов грубого экстракта пшеницы, белков, не связывающиеся с хитином и
способных к сорбции на хитин. Через 5 мин фильтры погружались в 0.1 М ФБ
pH 6.0 для отмывки от не связавшихся с биополимерами белков, затем
проявлялись на наличие пероксидазной активности.
Рис. 10. Сорбция пероксидазы пшеницы из полученных после хроматографии на хитине фракций белка на ацетилцеллюлозу: 1) грубый экстракт, 2) фракция не связывающаяся с хитином.
-| 2 3 3) хитиновый элюент.
Обнаружено, что на целлюлозный фильтр сорбции пероксидазы пшеницы не происходит, тогда как на ацетилцеллюлозе выявлялась сорбция пероксидазы из грубого экстракта и солевого элюента с хитина (рис. 10). Следовательно, при сорбции пероксидазы пшеницы как на ацетилцеллюлозу, так и на хитин, решающую роль играют ацетильные группы полисахаридов.
3.2.2. Локализация хитин-епецифичной пероксидазы в растениях пшеницы
Известно, что спектр пероксидаз зависит от возраста растений и характеризуется определенной органоспецифичностью [Лебедева и др., 2003]. Например, у пшеницы при ИЭФ в ПААГ проявляется не менее 17 изоферментов, некоторые из которых могут с возрастом изменять свою
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Электрохимическое восстановление цитохрома Р450 2В4 с использованием нанокомпозитных электродных материалов: стехиометрия и термодинамика | Рудаков, Юрий Олегович | 2009 |
Состояние прооксидантно-антиоксидантного баланса в процессе развития гнойной раны и возможности коррекции его нарушений (экспериментально-клиническое исследование) | Федосов, Сергей Ростиславович | 2009 |
Физиолого-биохимические аспекты метаболизма при разном уровне селена в рационе кур-несушек | Мишанин, Михаил Юрьевич | 2001 |