Масс-спектрометрический анализ фосфорилирования белков с использованием методов изотопного мечения и селективного концентрирования

• Автор: Каньшин, Евгений Дмитриевич
• Шифр специальности: 03.00.04, 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 151 с. : ил.

Обычно используемые подвижные фазы смеси воды и органического растворителя обладают подходящими физикохимическими характеристиками для образования электроспрся. Дальнейшим развитием техники ионизации в электроспрее явилось использование микроспрея и наноспрея, основными трудами считаются работы Манна и сотрудников , . В случае классического электроспрся используются иглы с диаметром 0 0 мкм и потоки порядка микролитров в минуту, в случае наноспрея используются диаметры 5 мкм, скорости потока нанолитры в минуту. Достигнутое увеличение эффективности ионизации составило 0 раз, что сдвинуло порог чувствительности для пептидов до аггомолей иногда зептомолей. МСП многократная тандемная массспсктрометрия для получения большей информации о структуре ионов. Недостатки наноспрся связаны с миниатюризацией необходимостью использования микроскопа для установки положения иглы а также некоторые проблемы с ВЭЖХ при данных скоростях потоков, но тем не менее эти проблемы разрешимы. Данные проблемы, в частности, оставляют нишу для микроспрея, который является компромиссом между элсктроспрсем и наноспреем и обладает промежуточными характеристиками. Ионизация I. В том же году когда метод электроспрся стал набирать популярность Хиленкамп и Карас открыли метод I ионизация в твердой матрице при помощи лазера от англ. Iii , также позволяющую получать ионы даже больших белков и работать с их малыми количествами. Данный метод оказался даже порой более простым и доступным по сравнению с ионизацией в электроспрее. Однако на момент создания он мог быть реализован только на времяпролетньтх массспектрометрах, которые утратили популярность в то время, уступив квадрупольмым массспектрометрам. Тем не менее, метод I также быстро обрел популярность. В данном методе ионизации анализируемый образец растворяется вместе с УФпоглошающим веществом называемым матрицей и раствор помещается на предметный планшет для массспектрометра. Растворитель испаряется, при этом происходит образование кристаллов УФпоглощающсй матрицы с включениями анализируемого вещества. Приготовленный таким образом образец помещается в массспектрометр вакуум, где под воздействием лазера происходит образование ионов и перенос их в газовую фазу Рис. Рис. Схема процесса ионизации I. Как II в случае ионизации в элсктроспрее, при ионизации МА1ЛЭ1 для пептидов белков обычно используются растворы с низким . Это способствует их ионизации что делает МАЬП1 эффективным способом получения положительно заряженных ионов пептидов белков. Отличием МАЬЕ1 от элсктроспрея является образование преимущественно однозарядных молекулярных ионов. К преимуществам МАЬЭ1 перед электроспреем можно отнести меньшую чувствительность к примесям, то есть не происходит значительного подавления процесса ионизации в присутствие некоторых примесей как в случае элсктроспрея, что позволяет, например, проводить анализ без использования ВЭЖХ. Тандемные массспектрометры. Основополагающими в области тандемной массспсктромстрии являются работы МакЛаферти и Дженингса, опубликованные в году 7, 8 и послужившие толчком к совершенствованию приборов и методов для получения информации о спектрах фрагментации изолированных по массе ионов. Принципиальная схема тандемного массспектромстра изображена на Рис. Рис. Схема тандемного массспектрометра в МБ1 происходит выбор иона по отношению массы к заряду для фрагментации в СС происходит фрагментация выбранных ионов, в МБ2 происходит разделение дочерних ионов. Первым типом тандемных массспсктрометров был традиционный массспектрометр высокого разрешения с обратной геометрией Рис. В массспектрометрах такого типа используется отклонение с помощью магнитного сектора для изоляции иона подлежащего фрагментации и определение отношения масс дочерних ионов к заряду в электрическом секторе МНСЕБанализ. Разрешение такого прибора невысоко как по родительским, так и по дочерним ионам. Значительно улучшить разрешение помогает использование двойной фокусировки. Схема прибора такого типа тандемного массспсктромстра ЕВЕВ геометрии изображена на Рис. В начале х были созданы тройной квадрупольный массспсктромстр Рис.