Исследование компонентов протеолитических систем крови в качестве субстратов цистеиновых катепсинов

• Автор: Фаенкова, Вера Петровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 142 с. : ил.

Впервые обнаружено, что цистеиновые катепсины вызывают деградацию стрептокиназы, что приводит к снижению, а затем и к полной потере ее плазминогенактивирующей способности. Обнаружено, что тромбин, плазмин, фибрин, фактор и С1 ингибитор системы комплемента устойчивы в действию цистеиновых катепсинов. Усовершенствована методика турбидиметрической регистрации процессов свертывания крови и фибринолиза. Разработан новый метод регистрации эффективности процесса активации плазминогена. ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ. Обнаружение способности цистеиновых катепсинов вызывать деградацию стрептокиназы развивает представление об их специфичности в отношении белковых субстратов. Быстрый протеолиз этого белкового препарата, используемого для активации фибринолиза i viv, может быть причиной кратковременности его действия. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Практическую значимость имеют методы, разработанные и использованные в работе. Способ выделения и очистки цистеиновых катепсинов может служить основой для получения индивидуальных катепсинов, а также ферментного препарата, перспективного для энзимотерапии ран. Способ определения активности активаторов плазминогена с использованием турбидиметрии может быть использован для исследования фармакодинамики активаторов плазминогена. Кроме того, он удобен для контроля состояния у больных с нарушениями системы свертывания и фибринолиза метод позволяет одновременно и быстро определить ряд диагностически важных показателей. Обнаруженная нами устойчивость тромбина, плазмина, фибрина, фактора О и С1ИНГ к действию цистеиновых катепсинов можно рассматривать как благоприятный факт в случае применения катепсинов для местной энзимотерапии. При выделениии цистеиновых катепсинов из тканей замена общепринятой процедуры фракционирования экстракта ткани сульфатом аммония проведением ионообменной хроматографии позволила упростить метод выделения ферментов и увеличить их выход. Тромбин, плазмин, фактор О комплемента и С1 ингибитор сохраняют свою функциональную активность при обработке их цистеиновыми катепсинами. Не происходит лизиса фибриновых сгустков под действием цистеиновых катепсинов. Стрептокиназа является хорошим субстратом цистеиновых катепсинов и разрушается под их действием с полной потерей своей активности. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации доложены на научной конференции, посвященной 0летию кафедры биохимии СПбГМУ СанктПетербург, на научной конференции, посвященной 0летию Военномедицинской академии СанктПетербург, на научной конференции Структура и функции протеолитических ферментов, Москва, на научной конференции, посвященной 0летию со дня рождения академика Н. И. Буланкина Харьков, на биохимическом конгрессе ВюсаЫуз Москва, . ВНЕДРЕНИЕ. Разработанные методы внедрены и используются в практике научных исследований и в учебном процессе на кафедре биохимии СанктПетербургского Государственного медицинского Университета имени акад. И.П. Павлова и могут быть рекомендованы к внедрению в научных учреждениях, занимающихся исследованием системы свертывания крови ЦНИИ гематологии и переливания крови Москва, Кировский НИИ гематологии и переливания крови М3 РФ, НИИ особо чистых биопрепаратов СанктПетербург. СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 2 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, общего заключения и выводов включает таблиц, рисунков и список литературы, содержащий 2 источника, в том числе 4 зарубежных. Цистеиновые протеиназы лизосом включают катепсины В К. Ф. 3. Н К. Ф. 3. Ь К. Ф. 3. Б К. Ф. 3. К 3. Особенностью этих ферментов является наличие в активном центре БНгруппы и зависимость их активности от соотношения в среде восстановленных и окисленных форм тиоловых или никотинамидных соединений 5, , , , , 0. Краткая характеристика цистеиновых катепсинов приведена в таблице 1. Катепсин В или В, К. Ф.3. Катепсин Вг К. Ф.3. Катепсин Н Ва или Вз К. Ф.3. Катепсин Ь К. Ф.3. Катепсин Б К. Ф.3. Катепсин К О2, X К. Ф.3.