Липазы грибов Cospora lactis и Rhizopus microsporus. Биохимические аспекты

• Автор: Давранов, Кахрамон
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Ташкент
• Количество страниц: 380 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ Стр.

ВВ ЕД Е НИ Е

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ИЗУЧЕНИЯ ЛИПОЛИТИЧЕСКИХ

ФЕРМЕНТОВ .

1.1. Свойства липаз

1.2. Специфичность

1.2.1. Влияние физического состояния субстрата на специфичность липаз

1.2.2. Специфичность к степени ненасыщенности жирной кислоты субстрата .

1.2.3. Позиционная специфичность

1.2.4. Специфичность к структуре, ацильногорадикала длине цепи жирных кислот

1.3. Липазы микроорганизмов
1.3.1. Распространение .
1.3.2. Регуляция . Ю
1.3.3. Локализация . ад
1.3.4. Множественные молекулярные.формы липаз и мето
ды их обнаружения
1.3.5. Внутриклеточный транспорт и секреция
1.3.6. Выделение, очистка и свойства .
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1. Культуры и условия их выращивания .
2.1.1. i
2.1.2. i i
З Стр.
2.2. Определение липазной активности .
2.2.1. Количественное определение
2.2.2. Энзимограммы
2.3. Электронномикроскопические исследования липаз
2.4. Определение углеводного компонента в молекулах липаз
2.5. Определение концевых аминокислот
2.6. Пептидные карты.
2.7. Выделение гликопептидов
2.8. Выявление групп активного центра .
2.9. Методика получения биоспецифических сорбентов
а синтез поликефамида
б синтез бутанолцеллюлозы .
2 Препаративный электрофорез
2 Субстратная специфичность
2 Определение глубины гидролиза растительных
масел.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ ГЛАВА 3. ЛИПАЗЫ ГРИБА I
З Л. Биосинтез липаз в процессе культивирования
3.1.1. Динамика роста и изменение липазной активности .
3.1.2. Зависимость липазной активности от условий культивирования и множественность форм липазы
4 Стр.
3.2. Локализация липаз
3.3. Выделение и очистка липаз . ЮГ
3.3.1. Внутриклеточные липазы . IIII
3.3.2. Внеклеточные липазы . III
3.4. Свойства липаз i .
3.4.1. Физикохимические свойства внутриклеточных
липаз i .
3.4.2. Физикохимические свойства внеклеточной ли
пазы . I2II
3.4.3. Каталитические свойства
3.4.4. Субстратная специфичностьразличных, форм ли
паз i
3.5. Молекулярные формы липазы i И
их взаимосвязь II4I
3.6. Ре з юм е I4II
ГЛАВА 4. ЖПАЗЫ ГРИБА I I .
4.1. Изменение активности и изоферментного состава липаз в процессе культивирования гриба и характеристика липазного комплекса
4.1.1. Локализация липаз
4.2. Фракционирование липазного комплекса и получение очищенных форм липаз
4.2.1. Выделение и очистка внеклеточных липаз
4.2.2. Выделение и очистка внутриклеточных липаз
4.2.3. Разделение и очистка различных молекулярных форм липаз гриба i i методом биоспецифической хроматографии
Очистка на бутанолцеллюлозе
Очистка на групповом сорбенте поликефа
миде .
5 Стр.
4.3. Свойства липаз йьгорив пйогоэрогиб .
4.3.1. Физикохимические параметры .
4.3.2. Специфичность .
4.3.3. Специфичность к типу реакции
4.4. Каталитические свойства .
а Ионы металлов
б Действие солей желчных кислот на активность липаз йциориа тогозрогиз.
в Альбумин и липазная активность .
4.5. Структурная характеристика формы 3 липазы
4.5.1. Функциональноважные аминокислоты .
4.6. Ре з юм е .
ГЛАВА 5. ПШРОДА МНОЖЕСТВЕННОСТИ МОЛЕКУЛЯРНЫХ ФОРМ Ж ПАЗ ГРИБА ИШОРиБ МКШОБРОйШ И ИХ ВЗАИМОСВЯЗЬ
5.1. Белок с нт 0, и его характеристика
5.1.1. Выделение белка с й 0, .
5.1.2. Свойства белка с й 0, 6
5.1.3. Взаимодействие белка с й 0, с различными молекулярными формами липаз .
5.2. Взаимопревращение различных форы липаз .
5.3. Гипотетическая схема возникновения множественности форм липазы
5.4. Р в з юм е
ГЛАВА 6. РЕЗУЛЬТАТЫ, ИМЕЮЩИЕ ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
6.1. Новые ферментные препараты
6. Липомикроспорин
6 Стр.
6.1.2. Липолактин
6.2. Иммобилизованные формы липаз .
6.3. Применение липаз в пищевой промышленности
а Получение жировых основ
б Ферментативный способ расщепления растительных масел.
в Осветление виноматериалов и фруктовых, соков .
г Применение.иммобилизованных форм грибных липаз
д Получение заменителя цельного молока .
6Л. Применение липаз в легкой промышленности
6.5. Микрокапсулы с включенными липазами
В ЫВО Д Ы.
Л И Т Е Р А Т У Р А
П р и л о ж е н и я
ВВЕДЕНИЕ


За последнее время описаны сотни штаммов бактерий, дрожжей, грибов, некоторых патогенных микроорганизмов, выделенных из различных источников, и показано, что многие из них обладают липазной активностью Войнарская, i. Вецезола, Луна, Вовк и др. Волкова, Лебедева, ii . Впервые действие микробов на жиры наблюдали i и i. И i подтвердили, что некоторые микробы способны расщеплять жиры. Так как кислотоустойчивые микроорганизмы богаты липидами, то естественно, что липазе этих микроорганизмов посвящены наиболее Обстоятельные работы прошлых лет. И липазу у , i, , Е. Авторами Показа
на способность этих микроорганизмов гидролизовать оливковое масло, триацетин и этилбутират. Сравнение липазной активности различных культур показало, что липаза туберкулезных бацилл хотя и расщепляла вое три субстрата, но по сравнению с липазой, выделенной ИЗ И i, была значительно менее активна. Как указывает Кузин , Дай и Уолкер обнаружили, что i i ii, vi И vi так же, как i i, продуцируют фермент, гидролизующий касторовое масло и трибутирин. Содержание липазы в самих бактериальных клетках не превышало ее содержания в культуральной среде, что привело авторов к выводу о секреции фермента перечисленными микроорганизмами. По данным Оппенгейыера , ii, изучая липазную активность целого ряда микроорганизмов, обнаружил, что только гноеродные кокки и туберкулезные бациллы способны расщеплять трибутирин. Бациллы тифа, дизентерии, кишечная и сенная палочки липазу не содержали, иднако, липаза была обнаружена в убитых телах возбудителя тифа и дизентерии. В г. Позже и i установили присутствие внеклеточного фермента у стрептококков группы А и Д. Интересная работа проведена в г. Селибером, который исследовал образование и разложение жиров некоторыми бактериями и сопоставлял их липазную активность с содержанием жира в микроорганизмах. Автор обнаружил, что микроорганизмы, которые накапливали большое количество жира, как правило, обладали высокой липазной активностью. Ггуег И изучали у штаммов грамположительных кокков и штаммов грамотрицательных палочек способность гидролизовать молочный жир и трибутирин. Наиболее активными оказались микроорганизмы родов , i, , i, . Эти же авторы получили липазу из i iii и изучили ее свойства, липаза была обнаружена в спорах i i . I0 исследовали штаммов ii и пришли к заключению, что наиболее активными штаммами являются ii И с. I0, исследовали липазную активность различных микобактерий по способности гидролизовать твины, триацетин и трибутирин. Авторы разделили все штаммы на две группы по величине активности относительно твинов. К первой группе, обладающей слабой активностью, были отнесены все типичные туберкулезные бактерии человеческого, бычьего и птичьего типов. Ко второй группе с выраженной активностью были отнесены фотохроыогенные по классификации Рюниона микобактерии. Триацетин и трибутирин все штаммы расщепляли примерно одинаково. Выраженная липазная антивность фотохромогенной группы микобактерий была обнаружена также i и ii . Авторы пришли к заключению, что липазная активность может служить дополнительным признаком для типизации микобактерий. Рыкова и Домарадский исследовали липолитическую активность некоторых патогенных бактерий. Липаза была обнаружена у вирулентных и авирулентных штаммов возбудителя туляремии, у всех видов изучаемых бруцелл и вакцинного штамма сибиреязвенного микроба. Наибольшую активность в отношении трибутирина
проявили туляремийные микробы. Липаза отсутствовала полностью у вакцинных штаммов чумного микроба и вирулентных штаммов возбудителя псевдотуберкулеза. Меринов определял липазную активность у 9 штаммов различных бруцелл. Автором установлено, что все исследованные штаммы, независимо от вида, происхождения и возраста, обладают способностью расщеплять трибутирин и твин . Липазная активность обнаружена у большинства штаммов , i, i vi,. Сан Клемент И Вадер , , определяли ЛИПазнуЮ активность у Вас. Обнаружены липолитически активные штаммы среди лептоспир, коринебактерий, пропионовых бактерий, актиномицетов и микоплазы i, , Трофименко и др. Рубан и др. Ърокерхоф, Дженсен, , Ызi, . Таким образом, липаза обнаружена у следующих родов бактерий , ii, , i, . Среди бактериальных липаз наиболее хорошо изучена липаза .