Исследование механизмов формирования гетерогенности тромбоцитов крови человека при их активации

• Автор: Котова, Яна Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 101 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Тромбоциты.

Рецепторы тромбоцитов.

Рецептор для коллагена

Тромбиновые рецепторы.

Рецептор для тромбоксана А2.

Пуринэргические рецепторы Р2 рецепторы

Рецептор Р2У1.

Рецептор Р2У

Р2Х1 рецептор.
Внутриклеточная сигнализация в тромбоците.
Фосфолипаза С.
ФосфоинозитидЗкиназный путь.
8гстирозинкиназа.
Митогенактивируемый протеин киназный путь МАРК.
вбелок управляемые калиевые каналы.
Циклический аденозин монофосфат цАМФ
Трансглутаминлзы и тромбоциты.
Тканевая трансглутаминаза ГО2.
Фактор Ха
Плазменный фактор ХШ
Тромбоцитарный фактор ХШ
Укутанные тромбоциты
ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Материалы.
2.2 Методы исследования.
2.2.1 Выделение тромбоцитов.
2.2.2 Титрование активных сайтов тромбина
2.2.3 Анализ гетерогенности тромбоцитов па проточном цитометре
2.2.4 Анализ секреции плотных гранул тромбоцитов.
2.2.5 Окраска активированных тромбоцитов антителами на тромбоспондин, фибриноген, факторУ, РАС1,
2.2.6 Анализ агрегации и гетерогенности субпопуляций тромбоцитов на
флуоресцентном микроскопе
2.2.1 Окраска фибриногена флуоресцеином I.
2.2.8 Электрофоретический анализ фибриногена, казеина и активностей фактора ХПа и тканевой трансглутаминазы по отношению к их субстатам.
2.2.9 Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
Характерис тика тромбоцитов стимулированных как тромбином, так и
тромбин с конвульксином.
Выявление роли вторичной секреции.
Внутриклеточная сигнализация, приводящая к формированию
укутанного тромбоцита.
Выявление типа тромбинового рецептора тромбоцита,
участвующего в формировании укутанного тромбоцита.
Роль тромбоцитарных трансглутаминаз в формировании гетерогенности тромбоцитов при их активации
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
БЛАГОДАРНОСТИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Имея очень прокоагулянтную поверхность, укутанные тромбоциты способны поддерживать протромбиназную активность. Есть указания на то, что они могут быть критическим звеном, как в нормальном гемостазе, так и при тромбозе. Однако, их точное значение в физиологам и патофизиологии, а также механизмы формирования такой гетерогенности тромбоцитов при активации не известны на сегодняшний день. Поэтому изучение сигнальных механизмов, ведущих к формированию укутанных тромбоцитов важно. Цель работы Экспериментальное исследование механизмов формирования гетерогенности тромбоцитов при их активации i vi. Научная новизна. В работе показано, что на образование укутанных тромбоцитов влияет АДФ, секрстируемый из плотных гранул тромбоцитов, через адренергический рецептор 2. Установлено, что в формировании гетерогенности тромбоцитов участвуют внутриклеточные пути сигнализации, идущие от рецептора 2 и связанные с действием аденилатциклазы, фосфоинозитид3киназы и тирозинкиназы. Установлено, что фактор ХШа и, особенно, тканевая трансглутаминаза вносят существенный вклад в формирование гетерогенности тромбоцитов при их активации. Научнопрактическое значение данной работы является фундаментальным. Результаты данной работы могут быть полезны как для понимания происходящих процессов тромбообразования, так и для создания на основе имеющихся знаний новых методов антитромботической терапии. АДФ из плотных 1рапул регулирует формирование гетерогенности тромбоцитов человека. Сигнализация от АДФ, регулирующая образование укутанных тромбоцитов, идет через пуринэргический рецептор Р2У. Пути внутриклеточной сигнализации, ведущие к формированию укутанных тромбоцитов адснилатциклаза, фосфоинозитидЗкиназа и 8гстирозинкиназа. Показано, что тканевая трансглутаминаза и фактор ХШа участвуют в формировании гетерогенности тромбоцитов крови человека при их активации. Глава 1. Тромбоциты от греч. ШготЬоБ сгусток и суЮБ, или кЧ0Б клетка, или кровяные пластинки, мелкие дисковидпые двояковыпуклые безъядерные постклсточныс структуры диаметром 24 мкм, циркулирующие в крови и реагирующие на повреждение сосуда. Они образуются в красном костном мозге в результате фрагментации участков цитоплазмы мегакариоцитов гигантских клеток костною мозга, поступают в кровь, в которой находятся в течение 5 дней, после чего фагоцитируются макрофагами, преимущественно в селезенке и легком. Количество тромбоцитов у здорового человека 0 00 0 на 1 мкл. Число тромбоцитов возрастает при пищеварении, тяжелой мышечной работе, беременности Козинсц Г. И., Макаров В. А. и др. Имеют место и суточные колебания днем тромбоцитов больше, чем ночью. Функции тромбоцитов многообразны и определяются большим числом специфических свойств способность к агглютинации, адгсзивности, образованию псевдоподий. Они содержат большое количество серотонина и гистамина, оказывающих влияние на величину просвета и проницаемость мелких кровеносных сосудов. У них есть две важных функции формирование тромбоцитарного агрегата и участие в формировании фибринового сгустка. Тромбоциты один из главных участников гемостаза. При повреждении сосудистой стенки тромбоциты приклеиваются к месту повреждения адгезия и друг к другу агрегация, создавая механический барьер, перекрывающий повреждение. Стимулом для активации тромбоцита может служить практически любое возмущение окружающей среды, вплоть до простого механического напряжения. Однако, основными физиологическими активаторами считаются коллаген главный белок внеклеточного матрикса, тромбин, АДФ аденозиндифосфат, появляющийся из разрушенных клеток сосуда или сскрстируемый самим тромбоцитами и тромбоксан Аг вторичный активатор, сскретирусмый тромбоцитами. Активаторы, связываясь с соответствующими рецепторами на мембране тромбоцита, способны переводить его в активированное состояние. Ниже перечислены основные виды ответов тромбоцита при его активации. Изменение формы. При активации за счет реорганизации цитоскелета дисковидный тромбоцит становится шарообразным и формирует псевдоподии.