Исследование некоторых биохимических компонентов респираторного ответа нейтрофилов в норме и патологии

• Автор: Глоба, Александр Георгиевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1991
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 180 с. : ил

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. РЕСПИРАТОРНЫЙ ВЗРЫВ И СВОЙСТВА МАРРНоксидазы. . .

1.1. Индукция респираторного взрыва

1.2. Кислородные продукты нейтрофилов

1.3. Свойства МАРРНоксидазы.

1.3.1. Флавопротеин ЕР.

1.3.2. Цитохром 8

1.3.3. Хиноны

1.4. Функциональные уровни оксидазы

ГЛАВА П. ФОРМИРОВАННЫЕ ПЕПТИДЫ И РЕКН0СЦИР0В0ЧНЫЕ

РЕАКЦИИ НЕЙТРОФИЛОВ
2.1. Формированные пептиды
2.2. Свойства формиллпептидных рецепторов.
2.3. Рекогносцировочные реакции нейтрофилов.
ГЛАВА Ш. РЕАКЦИИ ТРАНСДУКЦИИ И АКТИВАЦИИ МАОРНоксадазы . .
3.1. Основные этапы активации 1ШРНоксидазы
3.2. Трансдукция
3.2.1. Ионнотранспортные события
3.2.2. Оборот фосфоинозитидов
3.2.3. Изменения уровня Са2и.
3.2.4. Протеинкиназа С ПКС.
3.2.5. СТРсвязывающие регуляторные белки.
3.3. Терминальные реакции активации МАОРНоксидазы . ГЛАВА 1У. ОБРАЗОВАНИЕ ПЛАЗШИлБРАННОГО СИШАЛЬНОГО АТР И ЕГО ВОЗМОЖНАЯ РОЛЬ В РАЗВИТИИ РЕСПИРАТОРНОГО ОТВЕТА НЕЙТРОФИЛОВ.
4.1. Синтез на плазматической мембране .
4.2. Возможная роль САТР в активации нейтрофилов .
ЧАСТЬ П. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
ГЛАВА У. МЕТОДИКА ЭКСПЕРШЖНТА
5.1. Модели патологии
5.2. Выделение клеток
5.3. Получение обогащенных плазматическими мембранами
частиц ОПМЧ из нейтрофилов и макрофахюв
5.4. Исследование биосинтеза плазмамембранного
сигнального АТР ПС препаратами ОПМЧ
5.4.1. Инкубация и остановка реакции.
5.4.2. Изоляция и вдентификация ПСАТР.
5.5. Исследование включения Р ортофосфата в мембранные белки перитонеальных нейтрофилов морской свинки
5.6. Измерение продукции сулерокскда.
5.7. Исследование связывания ШЬР с рецепторами нейтрофилов .
5.8. Измерение флюоресценции триптофана в безбелковых
фракциях сыворотки крови и гомогенатов тканей .
5.9. Использованные реактивы.
ГЛАВА . дШМТШШЯ ПРОДУКЦИЯ СУПЕРОКСИ.ДА НЕЙТРОФИЛА
В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ.
6.1. Продукция супероксида нейтрофилами крыс и морских свинок при экспериментальной генерализованной
инфекции.
6.2. Продукция супероксида нейтрофилами обожженных крыс
влияние даларгина в системе i vii
6.3. Влияние даларгина i viv На продукцию су пероксида нейтрофилами обожженных и инфицированных
6.4. Продукция сулероксвда нейтрофилами человека при
ожоговой болезни.
ГЛАВА УП. СОСТОЯНИЕ НЕЙТРСФИЛЫЗЫХ РЕЦЕПТОРОВ К ШЕР
В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ
7.1. Состояние нейтрофильных рецепторов к формилпептиду
у крыс, инфицированных . аег. ,
7.2. Влияние даларгина на связывание ШР с рецепторами нейтрофилов интактных, инфицированных и обожженных
7.3. Состояние нейтрофильньк рецепторов к ГМР у ожоговых больных.
ГЛАВА УШ. СИНТЕЗ ПДАЗЙШШЕРАННОГО СИГНАЛЬНОГО АТР КАК РЕАКЦИЯ ТРАНСДУЩШ В АКТИВАЦИИ НЕЙТРОФШОВ
ПОД ДЕЙСТВИЕМ МР.
8.1. Зависимость биосинтеза плазмамембранного сигнального АТР препаратами ОПМЧ нейтрофилов морской свинки от концентрации ШII в среде и от времени инкубации .
8.2. Влияние на синтез плазмамембранного сигнального АТР перитонеальными нейтрофилами морской свинки, активированными ЩР.
8.3. Влияние ингибиторов дыхания митохондрий на синтез плазмамембранного сигнального АТР перитонеальными нейтрофилами морской свинки.
8.4. Синтез плазмамембранного сигнального АТР препаратами ОПМЧ, выделенными из перитонеальных макрофагов морской свинки
8.5. Связь АТРобразуадей активности ОЛЮ нейтрофилов
инфицированных крыс с продукцией супероксида . . . 7 8.6. Синтез плазмамембранного сигнального АТР нейтрофилами периферической крови человека в норме и
при хирургической инфекции
ГЛАВА IX. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЛИТЕРАТУРА
СПИСОК РАБОТ АВТОРА ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.
СЛИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ДАТ диацнлглицерол
КОН А конканавалин А
ОПМЧ обогащнные плазматическими мембранами частицы
ПКС протеынкиназа С
ПЫ плазматическая мембрана
ПСАТР плазмамембранный сигнальный аденозинтрифосфат
РВ респираторный взрыв
СОД супероксвдцнсмутаза
ТХУ трихлоруксусная кислота
хп хемоаттрактантный пептид
ЭГТА этишенбис4октаэтилен нитрнлотетрауксуеная кислота
ЭДТА этилендиамннтетрауксусная кислота
АОР аденозкндифоофат
АМР аденозинмонофосфат
АТР аденозинтрифосфат
сАМР циклический аденозинмонофосфат
ТР инозитолтрифосфат
рсср карбонилцианидртрифторметоксифенилгидразон
РШР ЫформилЬметионжллейцилЧ фенилаланин
РР флавопротеин
Р5ВА 5нторсульфонилбензояладенозин
вРР гуанозиндифосфат гг
ТР гуанозинтрифосфат
СТВ4 лейкотриен В
ЫШ никотинамидадениндинуклеотид восстановленный
ШРН никотшаащадеиндинуклеотидфосфат восстановленный
фактор активации тромбоцитов
I полифосфоинознтвды
I неорганический фссфатион
фосфолипаза С
Шк форболЗмиристатЗацетат
Введение


СО предложен в качестве диагностического теста на снижение резистентности организма к инфекции и угрозу сепсиса, так как установлено, что в этих случаях показатель д СО резко снижается. Методом скетчердовского анализа впервые исследовано состояние рецепторов к в ыейтрофилах интактных, обожженных и инфицированных крыс и некоторых обожженных больных. Установлено, что снижение числа рецепторов к в иейтрофилах при этих видах патологии не коррелирует с активностью респираторного ответа. Показано, что лечение обожженных к инфицированных крыс даларгином приводит д уменьшению сродства рецепторов к , нормализует исходно повышенный респираторный ответ нейтрофклов на и уменьшает летальность подопытных животных. Обнаружена ранее не описанная реакция трансакции сигнала к респираторному ответу нейтрофилов синтез ПСАТР. Установлено, что ПСАТР образуется в ответ на связывание со своими специфическими рецепторами из неорганического фосфата и в условиях аэробного фосфорилирования. Показано, что возникновение респираторного ответа в нейтрофилах под действием всегда параллельно сопровождается образованием ПСАТР препаратами ОПМЧ, выделенными из этих нейтрофилов и активированными и что интенсивность респераторного ответа на в патологии коррелирует со способностью ОПМЧ нейтрофилов к АТРобразованию. Методом ингибиторного анализа показано, что ПСАТР потребляется плазмамембранными протеинкиназами. Проведенные исследования вносят существенный вклад как в
представления о механизме активации нейтрофилов так и в исследования возможностей управления респираторным ответом нейтрофилов в патологии. Предложенный биохимический тест на резистентность организма к инфекции может найти применение в клинике. Часть I. Обзор литературы. Настоящий обзор рассматривает литературные данные о биохимических событиях, приводящих к возникновению респираторного ответа в нейтрофилах, которые являются основным объектом исследования. ФермейЬый комплекс, катализирующий образование супероксида, оксидаза и основные продукты респираторного взрыва рассматриваются в главе I. Глава И посвящена формилированным пептидам, один из которых является инструментом проведенных исследований, а также рассматривает свойства формилпептидного лнгандрецепторного комплекса. Преобразование рецепторного сигнала и завершающий этап развития респираторного ответа активация оксидазы рассматриваются в Ш главе. У глава касается биологической роли плазмамембранного сигнального АТР, возникающего вслед за образованием лигандрецепторного комплекса и, возможно, участвующего в возникновении респираторного ответа нейтрофилов. Глава I. Респираторный взрыв и свойства оксидазы. Индукция респираторного взрыва. Наиболее характерным ответом нейтрофилов на действие различных поверхностных стимулов является изменение типа и интенсивности дыхания клеток, получившее название респираторного взрыва. Респираторный взрыв РВ наблюдается не только в нейтрофилах, но и в других профессиональных фагоцитах моноцитах, макрофагах. Интенсивность активации дыхания различна в зависи
мости от типа клетки, источника, вида животного, а для макрофагов также от функционального состояния резидентные элицитные или активированные . В настоящее время установлено, что активация дыхания возникает еще до начала фагоцитоза, когда фагоцитируемая частица взаимодействует с плазматической мембраной нейтрофила, сопровождает акт поглощения и продолжается после завершения фагоцитоза i i 6 . РВ индуцируется также и при адгезии нейтрофилов к. Большинство из стимуляторов РВ биологически активны в той степени, в которой они контактируют с фагоцитарной клеткой в очаге воспаления или в кровяном русле. Многие стимулы индуцируют у нейтрофилов сразу несколько ответов, например, хемотаксис, секрецию, агрегацию, РВ и т. Обычно индукция того или иного ответа зависит от концентрации стимула. КГ М, а респи
раторный при М. Это позволяет предположить, что активация дыхания некоторым образом связана с другими функциями нейтрофилов, такими как хемотаксис, адгезия к эндотелиальным клеткам или коллагеновым волокнам, фагоцитоз, агрегация на поверхности кровеносных сосудов, индуцированная факторами комплемента и т.