Разработка методов получения биологически активных соединений для диагностики системы гемостаза

• Автор: Берковский, Арон Леонидович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 ОБЩЕЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ О ГЕМОСТАЗЕ

1.2 ПРИНЦИПЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЕМОСТАЗА

1.3 ПРОТРОМБИНОВОЕ ВРЕМЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ ТЕСТ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ПАТОЛОГИИ ВНЕШНЕГО ПУТИ СВЕРТЫВАНИЯ

1.3.1 Мониторинг оральной антикоагулянтной терапии.

1.3.2 Стандартизация определения ИВ

1.3.3 Причины ошибок определения МНО.

1.4 МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ТРОМБОПЛАСТИНА

1.5 АЧТВ ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ ТЕСТ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ПАТОЛОГИИ ВНУТРЕННЕГО ПУТИ СВЕРТЫВАНИЯ.
1.5.1 Использование АЧТВ реагентов для мониторинга антикоагулянтной терапии гепарином
1.5.2 Использование АЧТВ теста в диагностике нарушений внутреннего пути свертывания.
1.6 МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ТРОМБИНА
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Материалы, использованные в работе.
2.2 Методы, использованные в работе
2.2.1 Метод получения тромбопластина.
2.2.2 Метод полученш протромбина
2.2.3 Диализа тромбина
2.2.4 Определение активности тромбина.
2.2.5 Определение концентрации общего белка.
2.2.6 Коагулологические методы
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ПОЛУЧЕНИЯ ТРОМБОПЛАСТИНА
3.1 Влияние неионогенных детергентов и хаотропных агентов на процесс ЭКСТРАКЦИИ ТРОМБОПЛАСТИНА.
3.2 ВЛИЯНИЕ ИОНОГЕННЫХ ДЕТЕРГЕНТОВ НА ПРОЦЕСС ЭКСТРАКЦИИ ТРОМБОПЛАСТИНА
3.3 Разработка методов промышленного получения реагентов для ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПВ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ СВОЙСТВ
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ПОЛУЧЕНИЯ РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВИРОВАННОГО ЧАСТИЧНОГО ТРОМБОПЛАСТИНОВОГО ВРЕМЕНИ
4.1 Получение фосфолипидных экстрактов для создания на их основе теста АЧТВ
4.2 Разработка метода получения и исследование свойств АЧТВреагента с активатором эллаговой кислотой
4.2.1 Влияние состава АЧГВреагентов на их активность и чувствительность к дефициту VIII и IXфакторов свертывания
4.2.2 Влияние состава АЧ1Вреагентов на их чувствительность к гепарину.
4.3 Разработка метода получения и исследование свойств АЧТВреагента с активатором каолином
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ ТРОМБИНА И ИЗУЧЕНИЕ ЕГО СВОЙСТВ
5.1 Разработка метода получения тромбина
5.2 Изучение возможности применения полученного тромбина для
СОЗДАНИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ ТЕСТСИСТЕМ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРОМБИНОВОГО ВРЕМЕНИ И КОЛИЧЕСТВА ФИБРИНОГЕНА
5.2.1 Тест тромбиповое время
5.2.2 Определение фибриногена.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Определение активности тромбина. Определение концентрации общего белка. ГЛАВА 3. Влияние неионогенных детергентов и хаотропных агентов на процесс ЭКСТРАКЦИИ ТРОМБОПЛАСТИНА. ГЛАВА 4. Влияние состава АЧ1Вреагентов на их чувствительность к гепарину. ГЛАВА 5. Определение фибриногена. ЯР международный референтный препарат тромбопластина 1С5Н Международный Комитет по Стандартизации в Гематологии 1СТН Международный Комитет по Тромбозам и Гемостазу Р1УКА некарбоксилированные и нефункционирующие формы витамин Кзависимых факторов свертывания крови. Исследование системы гемостаза имеет большое, решающее значение для диагностики различных видов кровоточивости, тромбоэмболических синдромов, гематогенных тромбофилий и процессов диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, в том числе развивающихся при критических и терминальных состояниях 1, 2, 4, 5, 8, , . Постоянный лабораторный контроль коагулологической системы крови необходим также при проведении антитромботической терапии в процессе лечения сердечнососудистых заболеваний, ишемий и инфарктов различных органов, большого числа акушерских осложнений и болезней новорожденных 7, 9, , , , . Основу современного исследования гемостаза составляют четыре базовых теста, без выполнения которых определение коагулологического статуса пациента не может считаться полным и достоверным , . Этими тестами являются протромбиновое время, активированное частичное тромбопластиновое время, тромбиновое время и определение концентрации фибриногена. Они моделируют i vi три основные механизма коагуляционного каскада, а именно, внешний, внутренний и общий пути свертывания 3, , . Для проведения этих тестов, в отличие от подавляющего большинства обычных биохимических исследований, выполняемых при помощи простых химических соединений, необходимы сложные биологически активные субстанции, фактически представляющие собой вещества либо сами участвующие в процессе коагуляции i viv, либо являющиеся их близкими аналогами. Это обстоятельство оказывает большое влияние как на технику проведения самих коагулологических исследований, так и на требования, предъявляемые к этим веществам по чувствительности, воспроизводимости и стабильности результатов, получаемых с их помощью . В связи с этим повышается роль современных унифицированных методик диагностики свертывающей системы крови. До настоящего времени в нашей стране практически отсутствовало производство современных реагентов для выполнения стандартизованных коагулологических тестов. Большинство лабораторий, занимающихся исследованиями гемостаза, готовило реагенты для этих целей самостоятельно, что, естественно, приводило к получению несопоставимых результатов. Кроме того, часто отсутствие реагентов было причиной не полного обследования пациентов. В связи с этим внедрение в практику здравоохранения современных методов диагностики свертывающей системы крови представляется весьма актуальным. Цель работы разработать методы получения и исследовать свойства биологически активных соединений тромбопластина, АЧТВреагента и тромбина, для стандартизации выполнения четырех базовых коагуляционных тестов протромбинового времени, активированного частичного тромбопластинового времени, тромбинового времени и определения фибриногена по методу Клаусса. Исследовать влияние условий экстракции на свойства получаемого тромбопластина и на основании этого разработать метод выделения реагента, чувствительного к VII фактору свертывания. Изучить свойства полученного тромбопластина и доказать возможность его применения для определения протромбинового времени. Изучить влияние способов активации АЧТВреагентов на их чувствительность и активность для получения реагента с заранее заданными свойствами. Разработать метод получения АЧТВреагентов на основе различных активаторов каолина и эллаговой кислоты и фосфолипидов мозговых, соевых и эритроцитарных и исследовать их чувствительность к дефициту факторов внутреннего пути свертывания и присутствию антикоагулянтов гепарина.