Пространственная организация нативных гистоновых комплексов

• Автор: Драган, Анатолий Иванович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Киев
• Количество страниц: 157 c. : ил

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава I. СТРУКТУРА ХРОМАТИНА
1.1. Нуклеосомный уровень организации хроматина
1.2. Наднуклеосомные уровни организации хроматина
Глава 2. СТРУКТУРА НУКЛЕОСОМЫ
2.1. Особенности гистон - гистоновых и гистон - ДНК взаимодействий в составе нуклеоеомы
2.2. Динамика структуры нуклеоеомы
2.2.1. Действие мочевины на структуру нуклеоеомы
2.2.2. Влияние температуры на структуру нуклеоеомы
2.2.3. Влияние ионной силы и pH среды на структуру нуклеоеомы
Глава 3. ГИСТОНЫ
3.1. Общая физико-химическая характеристика гистонов
Н2А, Н2В, НЗ и НА
3.2. Структура и свойства тетрамера гистонов
(Н3-Н4)2
3.3. Структура и свойства димера гистонов Н2А-Н2В
З.А. Структура октамера гистонов (НЗ-НА~Н2А-Н2В)2
в растворе
П. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава А. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
А.І. Определение степени очистки препаратов гистонов

от примесей негистоновых белков
4.2. Измерение квантового выхода флуоресценции
4.3. Измерение анизотропии флуоресценции
4.4. Определение сС -спиральности гистонов
4.4.1. Расчет оС -спиральности гистонов методом регистрации спектров кругового дихроизма
4.4.2. Определение с<.~спиральности гистонов по гипохромному эффекту
4.5. Регистрация спектров поглощения тирозинового хромофора. Сольвентно-пертурбационная дифференциальная спектрофотометрия /СПДС
4.6. Тушение собственной флуоресценции гистонов
4.7. Определение длины волны максимума спектров флуоресценции тирозина в растворе и в составе белков
4.8. Измерение сдвигов спектров флуоресценции тирозинового хромофора. Параметр В
4.9. Установка для изучения люминесценции растворов биологических объектов
4.9.1, Технические характеристики установки
Глава 5. ОСОБЕННОСТИ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ И ПОГЛОЩЕНИЯ
ТИРОЗИНОВОГО ХРОМОФОРА В МОДЕЛЬНЫХ СИСТЕМАХ И В СОСТАВЕ БЕЛКОВ
5.1. Длинноволновой сдвиг спектров флуоресценции тирозина в растворах полиэтиленгликола и
мочевины
-5.2. Изменение положения максимума спектров тирози-

новой флуоресценции панкреатической рибонук-леазы (РНКаза А) и димера гистонов (Н2А-Н2В) при денатурации
Глава 6. ПРОСТРАНСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ДИМЕРА
ГИСТОНОВ (Н2А-Н2В)
6.1. Влияние ионной силы среды на конформацию
димера гистонов (Н2А-Н2В)
6.2. Послойное (зональное) расположение тирозилов в составе димера гистонов (Н2А-Н2В)
Глава 7. ПРОСТРАНСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ТЕТРАМЕРА
ГИСТОНОВ (Н3-Н4)2
Глава 8. ПРОСТРАНСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ОКТАМЕРА
ГИСТОНОВ (Н2А-Н2В-НЗ~Н4)2
8.1. Структурная организация октамера гистонов
в растворах с различной ионной силой
8.2. Анализ механизма зависимой от концентрации /JaCt ассоциации димеров (Н2А-Н2В) и тетрамера (Н3-Н4)2 в октамер гистонов (Н2А-Н2В)-(НЗ-Н4) 2~(Н2А»Н2В)
Ш. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

же раствора. При исследовании октамера гистонов осадок гистонов в сульфате аммония растворяли в 2 М А/аС1, 5 мМ трис-НС1 буфере (pH 7,6) и диализовали против этого же буфера с требуемой концентрацией соли в течении ночи при 4°С.
При денатурации белков мочевиной концентрированный раствор мочевины (10 М) добавлялся в раствор исследуемых белков. Значение pH растворов контролировали с помощью универсального ионо-метра ЭВ-74 (СССР). Показатель преломления растворов измерялся с точностью ± 0,0001 на рефрактометре ИРШ-22 (СССР).
В опытах использовали спектрально чистые препараты: Ь -
тирозин ( "Яеапав", Венгрия), полиэтиленгликол-300 ( "Ливіга-па?' Австрия), акриламид ( "бегисг ", Швеция), мочевина дважды перекристаллизованная, панкреатическая рибонуклеаза ( "Лтегвк-ат ", Англия). Используемые в опытах соли имели квалификацию "ч.д.а.".
4.1. Определение степени очистки препаратов гистонов от примесей негистоновых белков
Отсутствие негистоновых белков в препаратах гистонов было показано спектрофлуориметрическим методом. Применение спектро-флуориметрического метода для определения примесей негистоновых белков основоно на том факте, что негистоновые белки в отличие от гистонов содержат триптофан. Относительная поглощательная способность тирозина при 233 нм по сравнению с 280 нм примерно в 2 раза выше, чем у триптофана. Благодаря этому в результате сравнения формы спектров флуоресценции растворов гистонов при возбуждении 233 и 280 нм можно судить о присутствии негистоновых белков в препаравах гистонов. В нашем случае спектры флуоресценции гистонов при возбуждении 233 нм и 280 нм были идентичны. Кроме то-