Ингибиторы протеиназ типа Кунитца из картофеля: молекулярное клонирование и экспрессия генов

• Автор: Сперанская, Анна Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 190 с. : ил.

Однако имеются и исключения. Так, у представителей семейства 8КТ семейство могут присутствовать как два, так и три дисульфидных мостика. В связи с этим их разделяют на два структурных подсемейства А и В 6, база данных МЕ1ЮР8. Некоторые белки семейства Р семейство 3 содержат одну дисульфидную связь, в то время как в молекулах других белков этого семейства они отсутствуют 0. За счет дисульфидных мостиков отдельные участки полипептидных цепей образуют петли, экспонированные на поверхности молекулы и являющиеся важным структурным элементом для большинства типов ингибиторов. Одна или несколько петель могут создать возможность взаимодействия ингибитора с протеиназой, проникая к активному центру фермента, расположенному в желобе. Основной контакт осуществляется между аминокислотными остатками активного центра протеиназы и несколькими остатками, расположенными на поверхности петли ингибитора и образующими его реактивный центр. Молекула ингибитора, содержащая одну единицу ингибирования, может присутствовать как один реактивный центр, так и несколько. Например, у ингибиторов ВВ семейство 2 на единицу ингибирования приходится два реактивных центра 6, которые в ряде случаев способны связать одновременно молекулы двух ферментов. Способность ингибировать одновременно две сериновые протеиназы была обнаружена у серпинов и некоторых представителей семейства 8КТ 9. Ингибиторы, действующие на сериновые протеиназы, принято считать каноническими, поскольку они взаимодействуют с ферментом но субстратоподобному механизму. Однако, по крайней мере, в составе семи из известных семейств ингибиторов можно обнаружить белки, способные ингибировать ферменты разных классов. Так, было показано, что ингибиторы семейства ВВ семейство 2, а также ссрпины семейство способны подавлять активность как сериновых, гак и цистеиновых протеиназ , а ингибиторы семейства 8КТ семейство А сериновых, цистеи новых и аспартатных. Двуглавый ингибитор субтилизина из Зеротусея саейрНояш семейство 6 действует не только на сериновые протсиназы клана химотрипсина, но и на металлопрогеиназы 7. У а2макроглобулина человека обнаружена активность по отношению к наиболее широкому спектру протеиназ, он действует на асиартатные, цистеиновые, сериновые и металлопротеиназы. Ингибиторы треонииовых и глутаминовых протеиназ , 2, 6 в настоящее время не обнаружены 9. Существует предположение, что ингибиторы, относящиеся к одному семейству и, следовательно, сходные по структуре, могут действовать на протеиназы различных классов по одиному и тому же механизму 6. Однако некоторые близкие по структуре белки способны взаимодействовать с прогеиназами по различным механизмам. Так, например, большинство ВРТподобных белков животных семейство взаимодействуют с протеиназами по стандартному субстратоподобному механизму. Однако орнитодорип, белок из клеща ОгпЬосого тоиЬШа, относящийся к тому же семейству и состоящий из двух ВРТ1подобных доменов, содержит вставкиделеции в районе петли связывания с активным центром фермента, которые, фактически, привели к утрате способности белка действовать на протеиназы по каноническому механизму. Вследствие этого орнигодорин осуществляет стерическую изоляцию активного участка протеиназ, участвующих в процессе свертывания крови 0, 9. Ингибиторы типа Куниша, подссмсйство В Ишнбнгоры суГп и. Ингибиторы мста. СЫМПЧИ симноаь. Ингибиторы i. Рис. Поскольку большинство известных ингибиторов сериновых протеиназ взаимодействуют с ферментами по субстратоподобному механизму, то они обладают рядом структурных особенностей, позволяющих им конкурировать с субстратом за связывание с активным центром фермента конкурентное ингибирование. В результате формируется устойчивый комплекс, в котором фермент достаточно прочно связан с ингибитором. Эта связь может быть нековалентной и обратимой каноническое ингибирование, ковалентной неканонические ингибиторы, формирующие устойчивые соединения типа ацилфермент, или нековатентной и необратимой неканонические ингибиторы, формирующие устойчивые комплексы ферментпродукт.