Методы ДНК-доставки и мониторинга фактора некроза опухолей человека на животных моделях

• Автор: Суровцева, Елена Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04, 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 125 с. : ил.

Создание именно таких устойчивых во времени градиентов является желательным условием тестирования действия лимфокинов и ростовых факторов, однако эта задача технически не реализуема при введении испытуемых белков в систему в форме готовой субстанции. В этой связи более физиологичным методом доставки ростовых факторов представляется экспрессия клеточных медиаторов собственными клетками организма i viv, которая может быть достигнута при введении в отдельные клетки животного генной конструкции, несущей соответствующий структурный ген. В настоящее время стратегия борьбы со многими вирусными и онкологическими заболеваниями заключается во введении в организм человека ДНК, несущей ген соответствующего лимфокина 1. В этом случае уровень внутриклеточной экспрессии определяется, прежде всего, силой промотора, а также возможностью доставки ДНК к тканяммишеням. Экспрессирующийся i viv чужеродный белок может восприниматься организмом в качестве антигена. При этом на него могут вырабатываться антитела. ДНК в заданный участок тканимишени. Он опосредует ряд местных и системных эффектов и может рассматриваться в качестве противоракового терапевтического агента 2. Повышенный по сравнению с нормой уровень встречается при ряде заболеваний как инфекционной туберкулез, так и аутоиммунной склероз, саркоидоз, идиопатическая нейтропения этиологии. Его использование в качестве маркера для тестирования сывороток больных ставит важную задачу получения антител против этого клеточного медиатора. В этой связи физиологичным методом доставки этого ростового фактора представляется его индуцированная экспрессия собственными клетками организма i viv, которая может быть достигнута при введении животным генной конструкции, несущей соответствующий структурный ген. Тестирование эффективности доставки по продукции специфических поликлональных антител в случае ДНКдоставки является наиболее доступным. В связи с изложенным выше в качестве пели настоящей работы рассматривалась разработка дизайна генноинженерных конструкций для доставки растворимого человека в секреторной и внутриклеточной форме в клетки животных. Тестирование эффективности доставки по продукции специфических поликлональных антител против антигена, выработанного в организме животного, требовало разработки антительной тестсистемы с высоким уровнем чувстивитсльности. Создание оптимизированного полусинтетического гена человека и конструирование на его основе штамма на основе . Изучение свойств аффинноочищенных антител против человека при иммунохимическом исследовании сывороток больных рассеянным и боковым амиотрофическим склерозом. Изучая развитие раковых опухолей у животных, 4 обнаружил белок, в присутствии которого происходил геморрагический некроз трансформированных клеток. Этот фактор был назван фактором некроза опухолей . В норме белки этого семейства участвуют в дифференцировке различных тканей, в частности клеток лимфоидной, костной и нервной тканей, регуляции и реализации иммунных и воспалительных реакций, а также пролиферации и апоптозе клеток. Запуск клеточной гибели является одной из основных функций многих членов этого семейства, а для некоторых, повидимому, и единственной. Среди лигандов именно участвует в наибольшем количестве межклеточных реакций, выполняя роль важнейшего медиатора в передаче сигналов между клетками. Передача цитотоксического сигнала от внутрь клетки опосредована рсцепторами. Лиганды и рецепторы семейства . В настоящее время к семейству рецепторов относят 1 0, 2 0, 3 , , 1 , , , , 0X, , 3 АроЗ1 , 4 I1, 5 II2, 6, , I, I I, 6,7. Кроме этих белков, обнаруженных в человеческих клетках, в семейство входят рецептор 1, найденный в клетках цыпленка 8, белки вирусов герпеса V 9 и оспы, кодируемые генами , , . Отдельная группа белков этого семейства состоит из так называемых рецепторовловушек , являющихся укороченными вариантами рецепторов7. Рецепторы составляют единое в структурном отношении семейство мембранных белков. В их составе различают экстраклеточную концевую, трансмембранную и внутриклеточную Сконцевую области. Лигандсвязывающие домены экстраклеточной части характеризуются наличием повторяющихся последовательностей длиной около а.