Иммуноферментный анализ нейроспецифических белков в оценке нейродегенеративного процесса при экспериментальном ишемическом инсульте головного мозга

• Автор: Петров, Сергей Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 117 с. : 18 ил.

содержание радиоактивной метки, выраженное в процентах введенной дозы 1

V объем неповрежденной зоны левого полушария V объем неповрежденной зоны правого полушария Vi объем инфаркта или кисты
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Иммуноферментпый анализ , и МВР в СМЖ и сыворотке крови при моделировании фокальной ишемии головною мозга

1.1. Общая характеристика нсйроспсцифичсских белков

1.2 , и МВР маркеры повреждения нервной ткани

1.3. Методологические основы моделирования фокальной ишемии головного мозга

1.4. Экспериментальные модели фокальной ишемии головного мозга

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Общая схема эксперимента
2.2. Моделирование фокальной ишемии головного мозга
2.3. Оценки неврологического статуса и функционального состояния ЦНС
2.4 Техника взятия проб спинномозговой жидкости и крови
2.5 Морфологический анализ
2.7. Твердофазный иммунофермептный анализ , и МВР в биологических жидкостя
2.8 Радиоизототшос исследование распределения моноклональных антител к в крови и органах крыс с ОСМА
2.4. Статистический анализ..
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Динамика морфологических изменений головного мозга после односторонней окклюзии средней мозговой артерии
3.2. Мониторинг состояния организма и функций ЦНС после ОСМА
3.3. Иммуиофсрмснтный анализ нсйроспсцифичсских белков
3.3.1 Характеристика используемых и.ммунофер.ментных тсстсистс.ч
3.3.2 Динамика концентраций , и МВР в СМЖ и сыворотке крови крыс в течение 3х месячного постшнсмичсского периода
3.4 Корреляционный анализ связи концентраций НСБ в сыворотке крови с функциональным состоянием ЦНС и морфомстричсскимн показателями при экспериментальном ишемическом инсульте головного мозга
3.5. Исследование возможности проникновения моноклональных антител к в направлении кровьмозг у крыс после ОСМА
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Характерная для мозга повышенная потребность в глюкозе в качестве источника энергии свидетельствует о возрастании роли гликолиза, который как раз и обеспечивает превращение этого единственного источника энергии во внутриклеточный окислительный материал ацетилСоА. Повышенная стабильность ЫЯЕ вполне согласуется с представлением о том, что в мозге гликолитичсская система является как бы более защищенной от неблагоприятных воздействий. Вероятно, тому же соответствуют и сведения о возможном внутриклеточном существовании снолазы в составе макромолскулярных комплексов с другими ферментами, участвующими в энергетическом обмене в нейронах . Белок вРАР является главным комионстгом промежуточных филаментов астроцитов и формирует клеточный скелет дифференцированных астроцитов. Аминокислотный анализ вБАР выявил относительно большое содержание кислых аминокислотных остатков аспарагиновой и глутаминовой кислот, а также лейцина, глицина и аланина, что хорошо согласуется с положением изоэлсктричсской точки при 5,7 5,9 и высокой аиионообмеиной способностью. Мкоицсвым остатком является аланин или блокированный метионин. В зрелой ЦНС млекопитающих иммунорсакгнвиость СБАР ограничена глиальными филамеитами внутри протоплазматичсскнх астроцитов серого вещества и в фиброзных астроцитах белого вещества. У поверхности мозга она концентрируется в астроцитах, формирующих внешнюю мембрану дИа ИтИапя. Большое количество вРАР содержится также в субэисндимальиых астроцитах около желудочков мозга . Кроме того, иммуиогнстохимическнми методами ОБАР был обнаружен в некоторых шваниовских клетках леммоцитах , в глиоподобиых клетках мышечнокишечного сплетения , в клетках Купфера печени , клетках островков Лангсрганса поджелудочной железы , опухолях слюнных желез 2, в эпифизе 9 и его опухолях 1. При иммуногистохимичсском анализе выявлено перекрестное реагирование поли и моноклональных ангнОРАРангитсл с антигенами эпителия хрусталика мыши 6. Несмотря на обилие информации о многих белках из семейства промежуточных филаментов, пока сию мало известно о конкретных деталях тех функций, которые вРАР выполняет в астроцитах и астроцнтарных опухолях. Сформировалось только общее представление о том, что он стабилизирует цигоскелет этих клеток, поддерживая их форму и осуществляя взаимодействия филаментозпых структур с ядерной и плазматической мембраной 0, т. Сравнительно недавно были опубликованы результаты экспериментов, в которых удалось получить траисгепных мышей с полной элиминацией гена вРАР 1, 8, 3, 9. Б двух из этих работ СРАРдсфицитные мыши развивались нормально, и в тех областях их мозга, которые подвергались детальному невропатологическому исследованию, не было найдено никаких питоархитектурных нарушений 1. И хотя авторы этих работ ис исследовали отдаленные последствия удаления гена вРАР, они предполагают, что мыши с таким дефектом должны быть более склонными к ускоренному старению ЦНС. Это предположение было подтверждено в работе 8, авторы которой установили, что у таких мышей в возрасте 6 мес. Кроме того, их астроцитарные отростки короче и толще нормальных, что приводит к уменьшению общего числа контактов астроцитов с олигодендроглноцитами и маслиновыми оболочками. Значительно снижена и степень васкуляркзашш белого вещества, что также может объясняться исчезновением индуктивного воздействия астроцитов на эндотелиальные клетки. Эти результаты дополнительно подтверждают фундаментальную роль ОРАР в поддержании нормального функционирования как отдельных астроцитов, так и ЦНС в целом. Основной белок миелина 1У1ВР. МБР белок миелиновой оболочки аксонов белого вещества ЦНС и в значительно меньшем количестве в оболочках псриферичсскнъх нервов. Выделяют целую группу основных белков миелина, представленную несколькими изоформами с молекулярными массами от до ,5 кД. МБР содержит значительную долю днамниокислот около и в то же время около половины составляющих его аминокислот неполярные. Вторичная структура человеческого МБР на ,6 и состоит из слспиральных и 1складчатых элементов, соответственно 8.