Идентификация новых потенциальных генов-супрессоров опухолевого роста, метилированных при раке предстательной железы

• Автор: Ибрагимова, Ильсия Ильясовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 140 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Рак предстательной железы

1.2 Простатспецифический антиген

1.3 Метилирование ДНК

1.3.1 Ферменты метилирования.

1.3.2 Семейство метилСрОсвязывающих белков.

1.3.3 Функция метилирования

1.3.4 Роль метилирования в канцерогенезе.

1.4 Генысупрессоры опухолевого роста
1.5 Методы идентификации и анализа метилирования ДНК.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Клинический хматериал
2.2 Клеточные линии рака предстательной железы.
2.3 Мюгоаггау
2.3.1 Обработка клеток ингибиторами процесса метилирования
2.3.2 Реакция обратной транскрипции
2.3.3 Олигонуклеотидная гибридизация.
2.4 Выделение нуклеиновых кислот.
2.4.1 Выделение ДНК из клеточных культур.
2.4.2 Выделение РНК из клеточных культур.
2.4.3 Выделение Д4К из тканевых срезов, зафиксированных в парафине
2.4.4 Выделение ДНК из замороженных срезов тканей
2.5 Бисульфитная модификация ДНК.
2.6 Полимеразная цепная реакция
2.6.1 Бисульфитная ПЦР.
2.6.2 Метилспецифическая ПЦР
2.6.3 Метилспецифическая ПЦР в реальном времени.
2.7 Гельэлектрофорез.
2.8. Выделение продуктов амплификации из агарозного геля
2.9 Секвенированис
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Поиск генов, метилированных в клеточных линиях рака предстательной железы
3.1.1 Схема эксперимента
3.1.2 Ингибиторы процесса метилирования ДНК.
3.1.3 Определение оптимальной концентрации 5аза2диоксицптндина
3.1.4 Эпигенетическая реактивация генома и анализ полученных данных
3.2 Анализ экспрессии генов в клетках морфологически нормальной предстательной железы
3.3 Анализ СрОостровков
3.4 Определение статуса метилирования СрОостровков отобранных генов в клеточных линиях рака предстательной железы и морфологически нормальной ткани предстательной железы.
3.5 Анализ частоты метилирования генов РОЫМ4, КНЛ7, 8ЬСАЗ, ТАС8ТЭ2, ОАГЮЬ, А ОРЗ, X2,1П в клинических образцах простатической интраэпителиальной неоплазии и рака предстательной железы различных стадий
3.5.1 Ген РЭЫМ4.
3.5.2 Ген КЯТ7
3.5.3 Ген 8ЬСАЗ.
3.5.4 Ген ТАС8ТЭ2.
3.5.5 ГенСтАШЬ
3.5.6 ГенАСЗРЗ
3.5.7 Ген ИЗО.
3.5.8 Ген АЫХА2.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Секрет простаты представляет собой мутную жидкость белого цвета, которая увеличивает объем спермы, участвует в ее разжижении, оказывает буферное и ферментативное действие на эякулянт, активизирует движение сперматозоидов Гайворонский, . Рак предстательной железы РПЖ наиболее распространенное новообразование у мужчин. За период с конца х до начала х годов частота раковых заболеваний предстательной железы почти удвоилась. В последние годы наблюдается значительный рост данного заболевания Матвеев, . Согласно последним данным Американского Общества Рака i i РПЖ занимает первое место в структуре онкологических заболеваний и второе место по частоте летальных исходов среди мужчин. Было установлено, что в г. США будет диагностировано более 6 тыс. РПЖ и около тыс. . В Российской Федерации в г. РПЖ. По величине прироста показателя заболеваемости в России РПЖ занимает 1е место за период гг. Чиссов, . Внимание исследователей к проблеме РПЖ связано не только с увеличением общего количества больных, но и с ростом смертности от этого заболевания. При анализе заболеваемости РПЖ в России было показано, что почти у больных он впервые выявляется в 34й стадии. Из этого становится очевидным факт, что заболеваемость РПЖ в нашей стране намного выше за счет невыявленного локализованного рака Шульпекова, . Столь широкое распространение РПЖ ставит его в ряд наиболее важных социальных проблем современности. Если раньше заболевание было характерно для лиц пожилого возраста, то сейчас болезнь стремительно молодеет. Показатель прироста заболеваемости среди мужчин лет за последнее десятилетие вырос более чем в 3 раза, при этом вероятность возникновения РПЖ возрастает с каждым последующим десятилетием жизни Плохов, . Таким образом, существует очевидная необходимость в разработке методов, которые могли бы обеспечить раннее выявление заболевания и значительно повысить эффективность лечения. Несмотря на многие усилия на данный момент способов полного излечения РПЖ не существует. Ряд исследований показали, что, несмотря на успехи фармакологии в разработке антиандрогенных препаратов, за последние лет применения гормональной терапии не было отмечено выраженного снижения смертности от рака простаты. Надежды сократить число смертей от рака простаты основаны на двух тактиках ранней диагностике и эффективном лечении болезни в ее начальной стадии. ТРУЗИ и биопсия предстательной железы Красный и др. Пушкарь и др. Определение уровня ПСА имеет наибольшую специфичность и чувствительность из всех вышеперечисленных методов диагностики. На данный момент определение уровня простатспецифического антигена ПСА в сыворотке крови является наиболее широко применяемым методом диагностики и мониторинга течения РПЖ Лоран и др. Благодаря его внедрению в клиническую практику выявляются ранние стадии заболевания, стало возможным проводить не только мониторинг у пациентов с уже диагностированным заболеванием, но и осуществлять скрининг заболевания БШгпеу ег а До того как определение уровня ПСА стало носить массовый характер, диагностика рецидива заболевания основывалась на появлении клинических симптомов, таких как боли в костях или появление изменений в моче, указывающих на местный рост опухоли. Диагноз, как правило, ставился на поздних стадиях, и в большинстве случаев заболевание к этому моменту имело распространенный характер. Таким образом, использование ПСА в качестве онкомаркера стало общепризнанным в мире. ПСА гликопротеин, вырабатываемый секреторным эпителием простаты, функцией которого является снижение вязкости семенной жидкости. Данный белок относится к семейству гранулярных калликреинподобных пептидаз и представляет собой сериновую протеазу с трипсиноподобными свойствами ЬЦа е а. В большинстве своем Г1СА концентрируется в протоках простаты, но некоторая его часть диффундирует в кровеносное русло, где он связывается с двумя белками альфа1антихимотрипсином и альфамакроглобулином, которые инактивируют любую каталитическую активность ПСА путем формирования стабильного ковалентного комплекса Ргопеп е а