Синтез и метилирование ДНК в развивающихся этиолированных проростках пшеницы

• Автор: Кравченко, Светлана Александровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 113 c. : ил

Список сокращений, принятых в диссертации А - аденин
АТ - пара оснований аденина и тимина EtBr - бромистый этидий
GC - пара оснований гуанина и цитозина ноДНК - новообразованная ДНК мтДНК - митохондриальная ДНК яДНК - ядерная ДНК га5с - 5-метилвдтозин т6А - -метиладенин sam - s -аденозилметионин С - цитозин Т - ТИМИН
УМ - уровень метилирования остатков цитозина в ДНК, 100.т5С /(С + ю5с ), %

I. Обзор литературы
I. Природа, возникновение дополнительных оснований и содержание 5-метилвдтозина в ДНК растений
1.1. Природа дополнительных оснований в ДНК растений
1.2. Содержанке 5-метилдатозкна в ДНК растений
1.2.1. Видовые различия
1.2.2. Тканевая (клеточная) разнокачественность метилирования генома растений
1.2.3. Метилированные основания в ДНК субклеточных органелл растений (хлоропласта и митохондрии)
1.2.4. Метилирование ДНК при разных инфекциях и неблагоприятных условиях произрастания
1.2.5. Метилирование ДНК при прорастании семян
1.3. Возникновение дополнительных метилированных оснований
в ДНК растений
1.3.1. Механизм метилирования
1.3.2. Специфичность метилирования ДНК
1.4. Распределение 5-метилцитозина в геноме
1.4.1. Метилирование сателлитной ДНК
1.4.2. Содержание 5-метилцитозина в АТ- и бС -обогащенных фракциях ДНК
1.4.3. Метилирование повторяющихся и уникальных последовательностей ДНК
1.5. Метилирование и синтез ДНК
1.5.1. Возникновение полупрометилированных сайтов
1.5.2. Влияние 5-азацитидина

I.6. Возможная функциональная роль метилирования ДНК у эукариотов
II. Экспериментальная часть
2. Материалы и методы исследования
2.1. Обработка и посев семян пшеницы, отбор и пикировка проростков
2.2. Введение радиоактивной метки в ДНК проростков
2.2.1. Срезанные проростки
2.2.2. Целые проростки
2.3. Фиксация проростков и подготовка к выделению ДНК
2.4. Выделение ДНК
2.4.1. Использование модифицированного метода Шмидта и Таннгаузера для определения уровня метилирования и состава новообразованной ДНК
2.4.2. Выделение ДНК с проназной и РНКазной обработкой для фракционирования в градиенте плотности хлористого цезия
2.4.3. Выделение ДНК с проназной и щелочной обработкой
для анализа уровня метилирования
2.5. Фракционирование ДНК в градиенте плотности хлористого цезия
2.6. Анализ состава и уровня метилирования ДНК
2.6.1. Суммарная немеченая ДНК
2.6.2. Меченая новообразованная ДНК
2.7. Анализ состава (плавучей плотности) ДНК методом равновесного ультрацентрифугирования в градиенте плотности хлористого цезия

ления содержания ДНК (в микрограммах) проводили по калибровочной кривой, построенной для ДНК из тимуса теленка.