Каталитическое расщепление основного белка миелина антителами

• Автор: Белогуров, Алексей Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 120 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ.

ВВЕДЕНИЕ. .

ИСКУССТВЕННЫЕ КАТАЛИТИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА

АНТИТЕЛА НА АНАЛОГИ ПЕРЕХОДНЫХ СОСТОЯНИЙ РЕАКЦИИ.

ВВЕДЕНИЕ КАТАЛИТИЧЕСКИХ АМИНОКИСЛОТНЫХ ОСТАТКОВ В СВЯЗЫВАЮЩИЙ ЦЕНТР АНТИТЕЛА ПУТЕМ ХИМИЧЕСКОЙ МОДИФИКАЦИИ ИЛИ САЙТНАПРАВЛЕННОГО МУТАГЕНЕЗА.

СОЗДАНИЕ АНТИТЕЛ ДЛЯ КАТАЛИЗА ЭНЕРГЕТИЧЕСКИ НЕВЫГОДНЫХ ПРЕВРАЩЕНИЙ

АНТИИДИОТИПИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА.

ПОЛУЧЕНИЕ АБЗИМОВ ПУТЕМ РЕАКЦИОННОЙ ИММУНИЗАЦИИ.

АБЗИМЫ, СОДЕРЖАЩИЕ КОФАКТОРЫ

ГРАНИЦЫ ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ АБЗИМОВ.
ПРИРОДНЫЕ КАТАЛИТИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА.
КАТАЛИТИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА К ВАЗОАКТИВНОМУ ИНТЕСТИНАЛЬНОМУ ПЕПТИДУ.
КАТАЛИТИЧЕСКИЕ АКТИВНЫЕ ФРАГМЕНТЫ АНТИТЕЛ.
КАТАЛИТИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА К ТИРОГЛОБУЛИНУ.
ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА К ФАКТОРУ VIII СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ
ДНКГИДРОЛИЗУЮЩИЕ АНТИТЕЛА
КАТАЛИТИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА НЕОБЫЧНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ.
ПРИРОДНЫЕ КАТАЛИТИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА КАК ЧАСТЬ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИРОДНЫХ КАТАЛИТИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ. ОКСИДАЗНАЯ АКТИВНОСТЬ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ.
РАССЕЯННЫЙ СКЛЕРОЗ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
ТКЛЕТОЧНЫЙ ОТВЕТ В ПАТОГЕНЕЗЕ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА.
РОЛЬ ВКЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА.
РОЛЬ НАТИВНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА. ЗНАЧЕНИЕ .
КРОССРЕАКТИВНОСТЬ БАКТЕРИАЛЬНЫХ АНТИГЕНОВ КАК ВОЗМОЖНАЯ ПРИЧИНА
ВОЗНИКНОВЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ.
ПОДХОДЫ К ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА
ОСНОВНОЙ БЕЛОК МИЕЛИНА. СТРОЕНИЕ, СВОЙСТВА, ФУНКЦИИ .
МОЛЕКУЛЯРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ МИЕЛИНА
ОСНОВНОЙ БЕЛОК МИЕЛИНА, СТРОЕНИЕ, ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ .
ОПРЕДЕЛЕНИЕ САЙТСПЕЦИФИЧНОСТИ ГИДРОЛИЗА ОСНОВНОГО БЕЛКА МИЕЛИНА
АУТОАНТИТЕЛАМИ.
ИССЛЕДОВАНИЕ СУБСТРАТНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ АНТИОБМ АУГОАНТИТЕЛ НА МОДЕЛЬНЫХ
ПЕПТИДАХ.
КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГИДРОЛИЗА ОБМ И 53.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ПАЦИЕНТЫ И ЗДОРОВЫЕ ДОНОРЫ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ЖИВОТНЫЕ
ХИМИЧЕСКИЕ РЕАКТИВЫ И СОПУТСТВУЮЩИЕ МАТЕРИАЛЫ.
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ ПРОЦЕДУРЫ
РАБОТА С БЕЛКАМИ
РАБОТА С НУКЛЕИНОВЫМИ КИСЛОТАМИ.
МЕТОДЫ РАБОТЫ С БАКТЕРИЯМИ II I
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Низкая величина связывания абзима с субстратом Кт 1. М и высокая с аналогом переходного состояния реакции 0 нМ свидетельствует о гораздо более эффективной стабилизации переходного состояния, чем основного состояния реакции. Принцип стабилизации переходного состояния реакции, обеспечивший первые успехи в создании каталитических антител, был применен в большинстве последующих работ. Обшие принципы дизайна каталитически активных антител были сформулированы в г. Шоката и Шульца 8 катализ, осуществляемый абзимами, основывается на известных принципах ферментативного катализа и включает в себя стабилизацию переходного состояния, общий кислотноосновной, электрофильиый и нуклеофильный типы катализа, а также эффекты сближения. Также необходимо отметить, что абзимы, так же как и обычные ферменты, потенциально могут быть сгереоспецифичными катализаторами химических реакций. Сохранение высокой стерсоспецифичности, тем не менее, является основной трудностью при дизайне искусственных ферментов 9. В другом случае стереоспецифичный катализ антителами был реализован для перегруппировки Кляйзена Рис. Эта химическая реакция реализуется при биохимических процессах в виде стереоселективного превращения хоризмата в префенат разрыв С0 связи и образование СС связи и катализируется ферментом хоризматмутазой, ускоряющей процесс в 2Ю6 раз. Были получены антитела на два гаптена, которые представляли собой аналоги конкурентных ингибиторов реакции оксобициклононанов, имеющих геометрию, близкую к предполагаемой структуре переходного состояния этой реакции. Среди гибридомных клонов, секретирующих антитела к одному из гаптенов, был найден клон, антитела которого ускоряли реакцию в 0 раз ш12Ю3 с1, Кт5,15 М, причем превращение, как и в случае фермента, проходило стереоселективно. Рис. Схема реакции перегруппировки Кляйзена. ОНгруппы, а ее диметиловый эфир не являлся субстратом для антитела. Более того, эта реакция, характеризуемая высоким энтропийным барьером, в случае катализа антителом протекала практически без изменения энтропии. Авторы предположили, что причиной значительного ускорения реакции является замораживание субстрата в пространственно ограниченной конформации, приводящей к благоприятному изгибу связей. Метод иммунизации аналогом переходного состояния реакции оказался пригоден не только для стереоспецифичного катализа, но и для бимолекулярных реакций. Так, группа Лернера в г получила антитело В, катализирующее стереоспецифичную бимолекулярную реакцию амидного синтеза . При помощи аналогичной техники было получено антитело, катализирующее реакцию ДильсаАльдера Рис. Следует отметить, что ферменты, катализирующие эт реакцию, не описаны и скорее всего не существуют. Рис. Схема реакции, катализируемой антителом А. Полученное антитело А, названное авторами ДильсАльдеразой, избирательно катализирует неблагоприятную в обычных условиях экзоатаку на диен. В году была получена пространственная структура этого антитела, которая позволила детально описать механизм связывания исходных веществ в его активном центре и снижения энергетического барьера превращения. Позднее группой Шульца были получены антитела, катализирующие с высокой эффективностью кккискат другую реакцию, не встречающуюся в биохимических путях перегруппировку Копа Рис. Таким образом, спектр реакций, для которых может быть создан соответствующий абзим, заведомо шире, чем в случае обычных ферментов. Отдельно стоит упомянуть использование фосфонатов для индукции гидролитических абзимов. Некоторые фосфонаты являются эффективными ингибиторами эстераз и протеиназ, что объясняется их высоким сходством со структурами на основе тетраэдрического углерода, которые рассматриваются как переходное состояние гидролитических реакций . К настоящему времени при помощи иммунизации гаптенами на основе различных фосфонатов получено большое число антител, способных гидролизовать сложные эфиры 6, , карбонаты и некоторые амиды . Структура и свойства некоторых из них будут подробно рассмотрены ниже.