Влияние условий культивирования на термотропное поведение липидов Pseudomonas putida и Yersinia pseudotuberculosis

• Автор: Попова, Ольга Борисовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 109 с. : ил.

Содержание
Содержание.

Список сокращений

Введение.

1. Обзор литературы .

1.1. Строение мембран грамотрицательных бактерий.

1.2 Характеристика липидов мембран грамотрицательных

бактерий.

1.2.1. Особенности липидного состава.

1.2.1.1. Функции цвиттерионных липидов.

1.2.1.2 Функции анионных фосфолипидов

1.2.2. Шаперонное действие бактериальных липидов.
1.2.3. Особенности состава жирных кислот.
1.3. Полиморфизм мембранообразующих липидов бактерий.
1.4. Влияние внешних факторов на физикохимические свойства фосфолипидного матрикса мембран бактерий.
1.4.1. Влияние температуры.
1.4.2. Влияние тяжелых металлов
1.4.3. Влияние глюкозы и аэрации.
2. Материалы и методы
2.1. Биологические объекты.
2.1.1. Условия культивирования.
2.2. Экстракция липидов
2.3. Микротонкослойная хроматография липидов.
2.3.1. Системы растворителей для разделения липидов
2.3.2. Обнаружение липидов.
2.4. Количественное определение липидов
2.4.1. Определение общих липидов.
2.4.2. Определение фосфолипидов
2.4.3. Анализ состава жирных радикалов липидов.
2.5. Калориметрический анализ липидов
2.6. Анализ бислойных липидных мембран.
2.7. Атомноадсорбционный анализ.
2.8. ДСНэлектрофорез и иммуноблоттинг.
2.9. Количественный анализ результатов.
3. Результаты и обсуждение.
3.1. Влияние ионов тяжелых металлов и температуры культивирования на термотропное поведение липидов мсталлрезистентных штаммов i а
3.1.1. Сравнительная характеристика роста и липидного состава i I и i I .
3.1.2. Сравнительная характеристика жирнокислотиого состава i I и i I .
3.1.3. Фазовые переходы общих липидов мембран i.I и i I .
3.1.4. Анализ сорбционной способности липидов iI и i I .
3.1.5. Анализ проницаемости бислойных липидных мембран на основе
липидов i I.
3.2. Влияние условий культивирования на термотропное поведение липидов ii i
3.2.1. Влияние температуры, условий аэрации и глюкозы на липидный состав ii i
3.2.2. Влияние температуры, условий аэрации и глюкозы на жирнокислотныйсостав липидов ii i
3.2.3. Влияние температуры, условий аэрации и глюкозы на фазовые переходы липидов ii i.
3.3. Влияние адаптационных изменений в содержании лизофосфатидилэтаноламина ii i на конформацию
белка порина.
Выводы
Список литературы


ДСНэлектрофорез и иммуноблоттинг. Количественный анализ результатов. Результаты и обсуждение. Сравнительная характеристика роста и липидного состава i I и i I . Сравнительная характеристика жирнокислотиого состава i I и i I . Фазовые переходы общих липидов мембран i. I и i I . Анализ сорбционной способности липидов iI и i I . Влияние температуры, условий аэрации и глюкозы на фазовые переходы липидов ii i. Тта. Выяснение роли липидов в молекулярных механизмах адаптации бактерий к различным условиям существования является важной задачей современной физикохимической биологии, а также микробиологии и иммунологии. Мембраны бактерий обеспечивают первичный контакт клеток с окружающей средой и являются универсальной системой передачи информации. Под действием внешних факторов в мембране может изменяться степень жидкостности липидного матрикса, возникать нарушение баланса между содержанием бислойных и нсбислойных липидов, и, в свою очередь, липидбелковых взаимодействий , vi, , , что приводит к запуску адаптационного механизма клетки. Именно на бактериях впервые было показано, что компенсаторные приспособления к различным условиям осуществляются за счет композиционных и внутримолекулярных перестроек мембранных липидов и направлены на1 поддержание жидкокристаллического состояния липидного матрикса, оптимального для функционирования мембран , vi, , . Известно, что поддержание жидкокристаллического состояния мембран является необходимым условием для активной жизни бактерий, их устойчивости к воздействию различных факторов окружающей среды. Этот феномен называется гомеовязкостной адаптацией, и впервые был изучен на липидах ii i i, . Изменения в составе мембранных липидов, особенно в жирнокислотном составе липидного бислоя, играют главную1 роль в этом процессе. В настоящее время вместо термина гомеовязкостная адаптация предлагается использовать более точное понятие гомеофазная адаптация поддержание ламеллярной жидкокристаллической фазы липидов мембран i . Структурные и динамические характеристики липидного матрикса могут меняться под влиянием таких факторов как температура, давление, питательные вещества, , ионы, ксенобиотики, а также фазы роста культур бактерий , vi, , , . Поэтому изучение влияния внешних факторов на липидный матрикс мембран, как ключевых элементов взаимосвязи между внешней средой и внутриклеточными ответами микроорганизма, может прояснить вопросы резистентности, или, наоборот, уязвимости бактерий. Функциональная, роль бактериальных липидов определяется их локализацией во внешних слоях клетки и зависимостью активности различных белков мембраны от жидкостности липидного матрикса. Предполагается, что степень вовлечения липидов в. Распространенные бактерии, такие как , способны модулировать экспрессию генов в ответ на широкий круг стрессоров окружающей среды, обеспечивая, физиологобиохимическую адаптацию. Последние данные свидедельствуют о том, что бактериальные мембраны являются не только мишенями для внешних сигналов, но также первичными сенсорами и предшественниками вторичных мессенджеров при запуске адаптационного ответа мембран. Изменения в окружающей среде вызывают тонкие изменения мембранной жидкостности липидов, мембран, в результате сигнал из окружающей среды трансформируется в активацию транскрипции стрессовых генов, вовлеченных в клеточный ответ, в. Vi . Большое внимание уделяется роли липидов и их. Поскольку, разнообразие липидного состава, бактерий может обеспечивать различные механизмы гомеовязкостнойгомеофазной адаптации, то целью нашей работы было изучение изменения состава и термотропного. I и I , изолированных из морской среды, под действием температуры, а также таких внешних факторов как изменение режима аэрации,, наличие в питательной, среде глюкозы для . Оба вида характеризуются большим разнообразием условий обитания и, следовательно, обладают хорошими адаптационными . Бузолева . Работа выполнена при финансовой поддержке . МОН РФ гранты X3V и ВР4М И. РНП. Л . Развитие научного потенциала высшей школы на гг. V. .