Очистка и свойства протеолитических ферментов желудочно-кишечного тракта озерной лягушки

• Автор: Фиц, Ирина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Краснодар
• Количество страниц: 194 с.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Характеристика исследуемых ферментов
1.1.1. Пепсин
1.1.2. Трипсин
1.1.3. Химотрипсин
1.1.4. Коллагеназа
1.1.5. Эластаза
1.1.6. Лейцинаминопептидаза
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Материал и реактивы
2.2. Методы очистки ферментов
2.2.1. Определение количества ферментов
2.2.2. Приготовление ацетоновых порошков
2.2.3. Высаливание, диализ, концентрирование растворов
2.2.4. Гель-хроматография, обессоливание препаратов
2.2.5. Ионообменная хроматография
2.2.6. Изоэлекторфокусирование, определение изоточек ферментов
2.3. Биохимические методы исследования
2.3.1. Определение активности пепсина
2.3.2. Определение активности трипсина
2.3.3. Определение активности химотрипсина
2.3.4. Определение активности коллагеназы
2.3.5. Определение активности эластазы
2.3.6. Определение активности лейцинаминопептидазы
2.3.7. Определение концентрации белка
2.4. Методы изучения физико-химических свойств ферментов
2.4.1. Область рН-стабильности
2.4.2. Область рН-активности
2.4.3. Термостабильность, температурный оптимум действия
2.4.4. Определение молекулярной массы ферментов
2.4.5. Действие ионов металлов, активаторов и ингибиторов
2.5. Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Определение количества ферментов и их распределение в желудочно-кишечном тракте озерной лягушки
3.2. Выделение и очистка протеолитических фрментов озерной лягушки
3.2.1. Влияние обработки ацетоном на активность пищеварительных ферментов
3.2.2. Высаливание ферментов сульфатом аммония
3.2.1. Разделение ферментов пищевода гель-хроматографией на сефадексах
3.2.2. Разделение ферментов пищевода ионообменной хроматографией
3.2.3. Разделение ферментов пищевода изоэлекторофоку-сированием на колонке в градиенте плотности сахарозы
3.2.4. Разделение ферментов желудка гель-хроматографией на сефадексах
3.2.5. Разделение ферментов желудка ионообменной хроматографией
3.2.6. Разделение ферментов желудка изоэлекторофокусированием на колонке в градиенте плотности сахарозы
3.2.7. Разделение ферментов поджелудочной железы гель-хроматографией на сефадексах
3.2.8. Разделение ферментов поджелудочной железы ионообменной хроматографией
3.2.9. Разделение ферментов поджелудочной железы изоэлекторофокусированием на колонке в градиенте плотности сахарозы
3.3. Выделение ферментов языка озерной лягушки
3.3.1. Разделение ферментов языка изоэлекторофокусированием на колонке в градиенте плотности сахарозы
3.4. Гистологические исследования пищевода и желудка озерной лягушки
3.5. Свойства протеолитических ферментов озерной лягушки
3.5.1. Пепсин
3.5.2. Трипсин
3.5.3. Химотрипсин
3.5.4. Эластаза и коллагеназа
3.5.5. Лейцинаминопептидаза
3.5.6. Протеиназы языка
3.5.7. Ферменты кишечника головастиков
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Таблица
Сведения о присутствии трипсина и химотрипсина у различных животных
(приводится по [303])
Животные Тоипсин Химот] рипсин
Анионный Катионный Анионный Катионный
Лосось 1 1 2
Лягушкд + + + +
Черепаха - 1 1 I
Курица 1 1 ч
Свинья 1 1 2
Собака - 1
Примечание: + - обозначены ферменты с неизвестным зарядом молекулы.
Как видно из таблицы, трипсины и химотрипсины лягушки представлены анионными и катионными изоформами, однако, количество и заряд их молекул неизвестны. У большинства исследованных животных преобладают анионные химотрипсины. Авторами отмечено, что для земноводных и пресмыкающихся характерна высокая активность ферментов (табл. 4).
Таблица
Содержание протеиназ в поджелудочной железе некоторых позвоночных
(приводится по [303])
Вид животного Протеолитическая активность ед/г Трипсин мг/'г Химотрипсин Мг/'г
Тунец 1,6 0,06 0,
Жаба амфиума 19 6,0 2,
Жаба нектурус 10 2,5 2,
Лягушка питсеко 14 1,9 1,
Лягушка катесоиана (сытая) (голодная) 22 5,2 5,
12 1,9 1,
Черепаха НосІосЬетіз тіШіз 19 7,0 3,
Черепаха Р8еи(іетІ8 еіерапз 53 7,6
Черепаха СІїгуяетів рісіа 58 9,1
Курица 6,0 0,6 1,
Индюк 8,8 3,5 1,
Кенгуру 5,5 1,7 0,