Взаимодействие миелопероксидазы с ключевыми опсонинами плазмы крови-фибронектином и иммуноглобулином G

• Автор: Леонова, Наталья Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 103 с. : ил

Получение иммуноглобулина С с элементами модификации. Кинетические параметры комплексообразования миелопероксидазы с опсоническими белками. Обсуждение результатов. Выводы. Список литературы
Сокращения, принятые в тексте. Актуальность проблемы. Фагоцитоз, как реакция захвата и поглощения частиц клеткой является первичным способом получения пищи одноклеточными организмами. В процессе эволюции этот процесс превратился в высокоэффективный способ защиты внутренней среды организма от чужеродных макромолекул и клеток у всех видов животных. Изучение фагоцитоза берет начало от исследований И. И.Мечникова, разработавшего в г. У млекопитающих фагоцитоз, как реакцию защиты от инфицирующих агентов, осуществляют две специализированные системы клеток гранулоциты и макрофаги. Две трети всех гранулоцитов в крови человека составляют нейгрофилы НФ. Б зоне поражения они накапливаются ранее других типов защитных клеток. Биоцидный потенциал НФ чрезвычайно высок. Доминирующую роль в нем играют специализированные генераторы активных форм кислорода АФК НАДФНоксидаза и миелопероксидаза МПО. Кроме того, последняя может секретироваться во внеклеточное пространство вместе с рядом протеолитнческих ферментов, белков и пептидов специфически нацеленных на уничтожение патогена. Для максимальной эффективности фагоцитарной реакции фагоциты кооперируют с компонентами плазмы крови, в первую очередь, с белкамиопсонипами. Среди белковопсонинов, маркирующих патоген в качестве объекта фагоцитоза, ключевая роль принадлежит фибронектину ФН в неспецнфической фазе воспаления и иммуноглобулинам 1, в первую
очередь, при иммунном ответе. Участвуя в формировании надмолекулярной структуры иммунного комплекса, опсонины стимулируют его поглощение и ликвидацию объекта фагоцитоза лейкоцитами. Сложная система регуляторных связей с гуморальными факторами крови и опсоническими белками является гарантом эффективности микробоцидной функции как НФ, так и других защитных клеток, участвующих в неспецифической фазе иммунного ответа. Наряду с внутриклеточным уничтожением инфицирующих микроорганизмов, нейтрофилы способны поражать микробные клетки и в экстрацеллюлярном пространстве. Это достигается путем секреции во внеклеточную среду биоцидных факгоров. Причем, они могут вторично поглощаться другими клетками, например макрофагами, и усиливать их собственный цитотоксический потенциал. Это явление известно как феномен резорбтивной резистентности фагоцитов . Такие факгы установлены, в частности, для лактоферрина, эластазы и миелопероксидазы. Но, если для первых двух белков существуют рецепторы на поверхности макрофагов, то таковых не имеется для МПО, а белкипереносчики не известны. Поэтому нами был предпринят поиск потенциальных белковпереносчиков фермента. Причем, мы ограничились опсоиинами плазмы крови. В качестве первоочередных объектов были выбраны белки, играющие заметную роль в реализации фагоцитарной реакции ФН и ДО. Цель и задачи исследования. Цель настоящего исследования заключалась в изучении возможности прямого взаимодействия опсонинов с МПО и выявлении основных закономерностей такого взаимодействия. Были поставлены следующие задачи
1. Получение электрофорет ически высокоочищеных гомогенных препаратов МПО, II. Определение возможности комплексообразования МПО с фнбронектином и иммуноглобулином . Изучение влияния лигандов ФН на его взаимодействие с МПО. Основные положения выносимые на защиту. Совсестное выделение ФН и ПГ методом аффинной хроматографии экономичный способ получения высокоочищенных и стабильных препаратов этих белков. I и ключевые опсонины плазмы крови фибронектин и иммуноглобулине взаимодействуют с образованием комплексов. Термодинамические расчеты допускают самопроизвольное протекание такой реакции. Научная новизна. Впервые предложен способ совместной очистки ФН и ПГ. Впервые выявлена способность МПО образовывать комплексы с ключевыми опсонинами плазмы крови ФН, I. МПО с ФН ДС, АН, . Установлено, что движущей силой комплексообразования МПО с ФИ является энтропийная составляющая свободной энергии .