Взаимодействия ферментов гликогенолиза в условиях молекулярного краудинга

• Автор: Чеботарева, Наталья Александровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 50 с. : ил.; 20х14 см

Работа выполнена в отделе структурной биохимии белка Ордена Ленина Института биохимии им. А.Н. Баха Российской Академии Наук

Официальные оппоненты

доктор биологических наук, профессор доктор химических наук, профессор доктор биологических наук, профессор

Ведущая организация

ГОУ ВПО Российский университет дружбы народов

Защита состоится г. в час. на заседании

диссертационного совета Д 2.7. .по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Институте биохимии им. А.Н. Баха РАН по адресу Москва, Ленинский пр. , кор.

Муронец Владимир Израилевич Клячко Наталья Львовна Крицкий Михаил Сергеевич

С диссертацией в виде научного доклада можно ознакомиться в Библиотеке Биологической Литературы РАН по адресу Москва, Ленинский пр. , кор.

Диссертация в виде научного до да разослана м г.

аЪИ10
Учен секретарь диссу г нойного совета I
до гг .логических нау ж профессор Валуева Т. А.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность


Термо денатурация фосфорилазы Ь протекает по диссоциативному механизму, то есть включает стадию обратимой диссоциации димера на мономеры и следующую за ней стадию необратимой денатурации мономера. Осмолиты оказывают стабилизирующее действие при денатурации фосфорилазы Ь под действием . Пиридоксаль5фосфат в молекуле играет роль конформационного кофахтора, стабилизирующего активную структуру нативного фермента и регулирующего сродство к субстратам и эффекторам. Апробация работы. Результаты работы в качестве устных и стендовых докладов были представлены на II и III Съездах Биохимического Общества РАН Москва, С. Петербург, , Международном симпозиуме по Структуре, стабильности и фолдингу белков Москва, , II Международном симпозиуме Проблемы биохимии, радиационной и космической биологии Дубна, , Международном симпозиуме . 6 i i i , , Международной конференции по биокатализу Москва, , v i i ii i , , , ii Iii i. vi, i, , I ii i 2 3. ii i, . i, , III Съезде биофизиков России, Воронеж, , 7 i . ii ii i i x, , , Ii i i ii, , , , , , . Личный вклад автора. Автору принадлежит решающая роль в выборе направления исследований, в постановке и решении конкретных задач, обсуждении, оформлении и обобщении полученных результатов. Седиментационные исследования, расчеты и объяснение результатов проведены лично автором. Соавторы принимали участие в проведении экспериментов и обсуждении результатов. В исследованиях, проведенных в соавторстве с зарубежными коллегами, личный вклад автора заключался в постановке задачи, в проведении эксперимента, в обсуждении и оформлении полученных результатов. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 обзоров, статей в российских и международных журналах и 9 статей в сборниках. Глава 1. Нами Чеботарева и др. v . Метод основан на одновременном использовании шлиренопти ческой системы и абсорбционной сканирующей оптической системы аналитической ультрацентрифуги i, модель Е. Метод использован для изучения связывания с РЬ6 в условиях существования равновесия димер тетрамер в присутствии 1 мМ АМР, С. Доли димерной и тетрамерной форм определяли с помощью шлиренсистемы. А. Площадь под пиком соответствует концентрации данной олигомерной формы. Для оценки относительных долей димерной и тетрамерной форм фермента шлмренседиментограмму описывали эмпирическим уравнением суммы двух Гауссовых функций. Константу ассоциации равновесия 2 Т рассчитывали по формуле 1у2у2 Ро, где у доля димерной формы, Р0 молярная концентрация фермента в расчете на димер. Для определения концентрации свободного и количества , связанного димерной и тетрамерной формами , использовали абсорбционную оптическую систему рис. Б. Выбранная длина волны 1 нм соответствовала изобестической точке для спектров поглощения свободного и связанного флавина. Быстро движущаяся граница соответствует седиментации комплекса тетрамерной формы Ъ с , а медленно движущаяся граница седиментации комплекса димерной формы. с . Рис. Шлиренседиментограммы РЫ 7,6 мгмл в присутствии мкМ А. Седиментация комплексов с димерной и тетрамерной формами фермента Б, регистрация с помощью абсорбционной сканирующей системы при 1 нм. Скорость вращения ротора ООО обмин. М м б. М АМР, 0,1 М КС1, С. Плато у мениска i, формирующееся после оссдання комплексов фермента с лигандом, дает возможность рассчитать концентрацию свободного лиганда , по формуле , где общая концентрация , Ао соответствующее ей оптическое поглощение, определяемое независимо.