Белок, образующий с актином гель в экстракте селезенки

• Автор: Гиоева, Фатима Константиновна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 119 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ .

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Полимеризация актина и его организация в немышечных клетках .

2. Явление образования геля в клеточном экстракте . II

3. Актинсвязывающие гелеобразующие белки

4. Сокращение гелей в клеточных экстрактах .

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Гелеобразование в клеточном экстракте селезенки . .

2. Фракционирование компонентов геля
3. Доказательства того, что высокомолекулярный компонент геля является миозином
4. Доказательство роли миозина в образовании геля в экстракте селезенки. Реконструкция геля из очищенных компонентов.
ОБСУЖДЕНИЕ .
ВЫВОДЫ .
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Результаты настоящей работы открывают новые подходы для решения вопроса о механизмах регуляции вязкости цитоплазмы в немышечкых клетках и возможной роли этого процесса в подвижности и поддержании формы немышечных клеток. Для немышечных клеток характерш три состояния актина мономерный актин, отдельные микрофиламенты и структуры более высокого порядка пучки и сети микрофиламентов. I vi в растворе низкой ионной силы актин существует в виде мономерного глобулярного белка актин с молекулярным весом кД. Добавлением соли I до 0 мМ иили 2 до 0,52,0 мМ можно индуцировать его полимеризацию, если концентрация актина превышает некое критическое значение. Эта критическая концентрация невысока, но различна для актинов, выделенных из разных клеток, и зависит от условий полимеризации. Для актина из , например, она составляет 0,1 мгмл при С в 0,1 М I . Процесс полимеризации актина i vi сопровождается ростом вязкости, который во времени описывается сигмоидной кривой. Полимеризация начинается с нуклеации образования коротких затравок. Ее сменяет стадия элонгации, на которой к затравкам с обоих концов присоединяются мономеры актина. Увеличение длины филаментов прекращается, когда концентрация сактина снизится до критического значения наступает стадия равновесия 5. Полимеризацию актина можно заметно ускорить добавлением готовых затравок например, филаментов актина, разрушенных ультразвуком 2. Филаменты могут спонтанно ломаться в растворе, увеличивая. I моль связанного АТФ на моль белка при полимеризации актина происходит гидролиз связанного АТФ 4. Раствор полимеризованного актина рактин содержит, как можно видеть под электронным микроскопом, длинные, до 3 мкм, нити диаметром Каждый филамент актина по внешнему виду напоминает двойную спираль с периодом нм . Филаменты актина обладают большой гибкостью и легко перепутываются, образуя сеть ИЗ. Раствор актина является тиксотропным . Актиновые филаменты полярны, что хорошо видно на филаментах, декорированных тяжелым меромиозином . Один из концов декорированного филамента выглядит под электронным микроскопом как наконечник стрелы, другой как ее оперение. На стадии элонгации к разным концам филамента мономеры актина присоединяются с разной скоростью, эта скорость заметно выше для оперенного конца 6. Поэтому после наступления равновесия, то есть когда уже не происходит увеличения длины филаментов, на оперенном конце идет, повидимому, преимущественно полимеризация, а на остром деполимеризация актина 6. Актин содержится в любой эукариотической клетке, причем в довольно высокой концентрации для подвижных клеток его содержание может составлять до общего белка клетки . Условия, существующие внутри клетки, и высокая концентрация актина должны были бы способствовать его полимеризации. Тем не менее в цитоплазме немышечных клеток значительная часть актина до , как правило, содержится в неполимерном виде . Существуют специальные белки, удерживающие актин от полимеризации. Один из них профилин, белок с молекулярным весом нД. Он образует очень прочный комплекс с актином, стабилизируя его в форме мономера . Этот комплекс настолько прочен, что i vi он диссоциирует только при денатурации актина в 2 М мочевине 9. Эта диссоциация, вероятно, происходить при участии специальных белков во всяком случае, для осактинина показана способность вызывать полимеризацию актина из комплекса с профилином i vi . Что касается полимерного актина, то есть микрофиламентов, их организация в немышечных клетках лабильна и разнообразна. Но в сущности, все это разнообразие можно свести к двум типам структур пучкам и сетям из микрофиламентов. В клетках, выращенных в культуре, микрофиламенты часто выявляются в виде высокоорганихованных пучков волокон натяжения 9, . Такой тип окрашивания характерен для хорошо распластанных клеток. В делящихся клетках микрофиламенты концентрируются, в области веретена между полюсами и хромосомами 5, а при цитокинезе образуют сократительное кольцо 1. Некоторые клетки имеют особые, только им свойственные структуры, состоящие из микрофиламентов.