Свободно-радикальные и мутационные процессы у животных, предадаптированных к окислительному стрессу

• Автор: Азарова, Анна Эдуардовна
• Шифр специальности: 03.00.04, 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 149 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. АФК зависимые процессы и их регуляция

1.1.1. Источники активных форм кислорода

1.1.2.Механизмы защиты от токсического действия кислорода и его активных форм

1.1.3. Окислительный стресс и ДНК

1.2. Адаптация и резистентность

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Постановка эксперимента

2.2. Получение биологического материала

2.2.1. Получение плазмы крови
2.2.2. Приготовление суспензии эритроцитов и гемолизатов
2.2.3. Приготовление гомогенатов тканей
2.3. Биохимические методы исследования
2.3.1. Хемилюминесцентный ХЛ анализ
2.3.2. Определение содержания диеновых конъюгатов
2.3.3. Определение содержания шиффовых оснований
2.3.4. Определение содержания малонового диальдегида
2.3.5. Определение содержания белка
2.3.6. Определение активности супероксиддисмутазы
2.3.7. Определение активности каталазы
2.3.8.0пределение концентрации гемоглобина в гемолизате
2.3.9. Определение оксидазной активности церулоплазмина
2.3 Определение суммарной пероксидазной активности в плазме
2.4. Генетические методы исследования
2.4.1. Приготовление препаратов для подсчета анафаз и МИ в эпителиоцитах роговицы глаза крыс
2.4.2. Б0Б1ихтест
2.5. Статистическая обработка результатов исследования ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Интенсивность свободнорадикальных процессов и активность антиоксидантных ферментов в отдаленные сроки после воздействия ГБО на новорожденных животных
3.2. Интенсивность Н2люминол зависимой ХЛ в тканях прсдадаптированных животных при ГБОиндуцированном окислительном стрессе
3.2.1. Интенсивность ХЛ в плазме прсдадаптированных крыс при окислительном стрессе, индуцированном ГБО 0,5 МПа
3.2.2 Влияние предадаптации на выживаемость животных в условиях ГБО при давлении 0,7 МПа
3.2.3. Интенсивность ХЛ в различных тканях предадаптированных крыс при окислительном стрессе, индуцированном ГБО 0,7 МПа
3.3. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях предадаптированных животных при ГБОиндуцированном окислительном стрессе
3.3.1. Интенсивность перекисного окисления липидов в плазме и эритроцитах предадаптированных животных при ГБО
индуцированном окислительном стрессе 0,5 МПа 1ч
3.3.2. Интенсивность ПОЛ в различных тканях предадаптированных животных при ГБОиндуцированном стрессе 0,5 МПа 1ч
3.3.3. Интенсивность ПОЛ в плазме и эритроцитах
прсдадаптированных крыс при ГБОиндуцированном стрессе 0,7 МПа до судорог.
3.3.4. Влияние предадаптации на интенсивность ПОЛ в тканях животных при ГБОиндуцированном стрессе 0,7 МПа до судорог.
3.4. Активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах и тканях предадаптированных животных при ГБОидуцированном стрессе.
3.4.1. Влияние предадаптации на активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах и тканях животных при ГБОиндуцированном стрессе 0,5 МПа 1ч
3.4.2. Влияние предадаптации на активность СОД и каталазы в эритроцитах и тканях крыс при ГБОиндуцированном стрессе 0,7 МПа до судорог
3.5. Мутационные процессы у животных предадаптированных к окислительному стрессу
3.5.1. Влияние предадаптации на генотоксичность тканей животных при ГБОиндуцированном окислительном стрессе
3.5.2. Кпастогснная адаптация к ГБОиндуцированному 0 окислительному стрессу
3.5.3. Пролиферативная активность эпителиоцитов роговицы
3.5.4. Аберрации хромосом и пролиферативная активность 8 эпителиоцитов роговицы у потомков предадаптированных животных
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Теоретическое и практическое значение работы В общетеоретическом плане выполненная работа расширяет существующие представления о механизмах предадаптации млекопитающих к окислительному стрессу. Данные, представленные в работе, позволяют как количественно, так и качественно оценить влияние предадаптации новорожденных животных на устойчивость к повреждающему воздействию на ткани организма ГБО индуцированного стресса. ГБО в новорожденный период организм взрослых животных к окислительному стрессу. Полученные в работе данные представляют существенный интерес для раскрытия АФКзависимых механизмов приспособления организма к постоянно меняющимся условиям окружающей среды, а также для разработки различных методов повышения резистентности организма к экстремальным условиям среды. Полученные результаты расширяют представления о свободнорадикальных и мутационных процессах в организме при окислительном стрессе, открывают новые перспективы их практического применения в адаптационной медицине. Полученные в работе новые экспериментальные данные используются в курсах лекций Свободные радикалы в живых системах, Мутагены окружающей среды, Химический мутагенез, Концепции современного естествознания. ГЛАВА 1. На сегодняшний день наши знания о свободных радикалах кислорода и их активных метаболитах позволяют с уверенностью сказать, что они играют ключевую роль во многих биохимических и генетических процессах, протекающих в клетке , ii, , , . Вероятность того, что клетка использует активные формы кислорода АФК для решения проблем позитивной регуляции, кажется высокой, учитывая какую значительную долю метаболизм кислорода занимает в общем метаболизме . Аргументом в пользу этого является и то, что избытка антиоксидантной защиты в клетке нет, в здоровой клетке существует оптимальное соотношение между продукцией АФК и их улавливанием. Образование АФК в процессах метаболизма следует рассматривать не только как нежелательное явление, но и как отражение эволюционно сложившейся потребности организма , Арнхольд, . Например, в атмосфере чистого кислорода у крыс активность СОД увеличивается на , причем, большее увеличение ее активности уже токсично, и поэтому должно быть сбалансировано i, . Воздействие АФК инициирует многие синтетические процессы. На сегодняшний день известно много белков, которые индуцируются под воздействием АФК Дас, Молик, . Судя по всему, это происходит на уровне транскрипции. При окислительном повреждении ДНК происходит остановка деления клеток многоступенчатый процесс, нарушение которого ведет к тяжелым заболеваниям, при которых резко увеличивается частота возникновения рака. В каскад реакций фосфорилирования, участвующих в остановке деления клеток, входит специфическая фосфатаза, ген которой индуцируется АФК. Известно также, что АФК стимулируют дифференцировку, причем, ей предшествует остановка деления. Пескин,. Описано применение экзогенных АФК при лечении болезней органов дыхания, расстройств эндокринной и вегетативной нервной системы, ревматизма, гипертонической болезни и других Гольдштейн, . В то же время АФК являются посредниками при патологических процессах канцерогенезе и других болезнях человека ишемии, инсульте, бронхиальной астме, диабете, атеросклерозе и др. Шведова и др. Кастранова, Лю и др. ДНК, инактивируют ферменты и гормоны, вызывают деструкцию мембран и теломерных участков хромосом, нарушение клеточного цикла, в конечном итоге, вызвают гибель клетки i . Зиновьева, Спасов, . Источники активных форм кислорода. Кислород является хорошим акцептором электронов и сильным окислителем. Присоединение электронов сопровождается освобождением довольно большого количества энергии. Но в каталитических центрах этих ферментов кислород испытывает превращения до конечных соединений, не выделяясь в среду и не подвергая опасности органические макромолекулы клетки, повреждающими же агентами являются активные формы кислорода АФК, образующиеся в ряде физикохимических процессов в организме. Активные метаболиты кислорода образуются в клетке при одноэлектронном восстановлении молекулярного кислорода.