Аутоантитела к ДНК в сыворотке крови больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом

• Автор: Темесген Белайхун Кибрет
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 117 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Аутоантитела к ДНК

1.1.1. Полиреактивность А АТ к ДНК.

1.1.2. Происхождение ААТ к ДНК.

1.1.3. Каталитическая активность ААТ к ДНК.

1.2. Взаимосвязь вирусных инфекций и аутоиммунитета

1.2.1. Индукция аутоиммунных процессов при вирусных инфекциях

1.2.2. Аутоантитела к ДНК при вирусных инфекциях.

1.2.3. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом ГЛПС
краткая характеристика.
1.2.4. Изменения в иммунной системе при ГЛПС.
1.2.5. Циркулирующие иммунные комплексы при ГЛПС.
1.3. Участие иммуноглобулинов М М в регуляции иммунного
ответа.
1.3.1. Функциональные свойства 1
1.3.2. Роль в регуляции иммунного ответа на вирусные
Инфекции.
1.3.3. Роль 1М в регуляции аутоиммунного процесса.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1. Оборудование и реактивы.
2.2. Объект исследования.
2.3. Определение аутоантител к ДНК методом ИФА.
2.3.1. Подбор оптимальной концентрации конъюгата.
2.3.2. Статистическая обработка результатов
2.4. Выделение циркулирующих иммунных комплексов.
2.5. Определение ДНК абзимной активности в сыворотке крови
2.6. Выделение и очистка и 1М иммуноглобулинов
сыворотки крови
2.6.1 Осаждение иммуноглобулинов сульфатом аммония
э 2.6.2 .Обессоливание САфракции методом гельфильтрации
2.6.3. Хроматография на колонке с САЕсефадексом А
2.6.4 Аффинная хроматография ААТ к ДНК на нДНК и дДНКцеллюлозе
2.6.5 Выделение 1 ААТ к ДНК
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Содержание ААТ к нативной и денатурированной ДНК
в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц
3.1.1. Содержание ААТ к ДНК в сыворотке крови при ГЛПС
3.1.2. Содержание I ААТ к ДНК в сыворотке крови при ГЛПС
3.1.3. Зависимость содержания ААТ к ДНК от уровня
содержания I.
3.2. Характеристика ЦИК в сыворотке крови больных и
здоровых лиц.
3.2.1. Содержание ЦИК в сыворотке крови больных ГЛПС
3.2.2. Определение ААТ к ДНК в составе ЦИК
3.2.3. Зависимость содержания ААТ к ДНК в ЦИК от уровня их содержания в сыворотке крови больных ГЛПС
3.3. ДНКабзимная активность в сыворотке крови больных ГЛПС
3.3.1. Определение абзимной активности в сыворотке крови
3.4. Выделение и характеристика 1ОААТкДНК
3.4.1. Определение удельной активности ААТ к ДНК
3.5. Выделение и характеристика 1М ААТ к ДНК.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ЛИТЕРАТУРА


Нарушение механизмов иммунорегуляции может привести к развитию аутоиммунных процессов в организме с повышением содержания в сыворотке крови аутоантител ААТ к собственным антигенам организма, что обычно сопровождается патологическими изменениями в различных органах и тканях . i . Для большинства аутоиммунных заболеваний АИЗ характерно повышение содержания в сыворотке крови ААТ к нативной и или денатурированной ДНК, что рассматривается как один из диагностических признаков аутоиммунных заболеваний , i . . На различных моделях аутоиммунных патологий продемонстрирована возможность активного участия ААТ к ДНК в развитии заболевания Сучков и др. i . . ii . . Они обладают цитотоксической активностью i , , . i . . ДНКгидролизующей активностью Сучков и др. Имеются прямые доказательства повреждающего действия ААТ к ДНК при СКВ на ткань клубочков почек i, v , i . i, , . В последние годы появились сведения об обнаружении признаков аутоиммунных процессов при вирусных заболеваниях, которые не относятся к АИЗ . Повышение содержания в сыворотке крови ААТ к компонентам собственных клеток и тканей, в том числе к ДНК, выявлено в сыворотке крови при вирусном гепатите . ВИЧ i . , , , вирусном энцефалите Гармашова и др. . Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом ГЛПС, вызываемая РНКсодержащими хантавирусами , i . i, , является одним из опасных, характеризующихся высокой летальностью, вирусных заболеваний. Для ГЛПС характерно поражение многих органов и систем, в особенности почек, вследствие повреждения сосудов микроциркуляторного русла Сиротин, . Одним из основных факторов повреждения почек при ГЛПС являются циркулирующие иммунные комплексы ЦИК, содержащие, наряду с антителами к вирусу, различные продукты гиперактивации иммунной системы, в том числе аутоантитела к собственным антигенам СомоваИсачкова и др. В литературе отсутствуют сведения по характеристике спектра аутоантител при ГЛПС, и, неизвестно, присутствуют ли у больных ГЛПС в сыворотке крови и в составе ЦИК ААТ к ДНК. ААТ к ДНК, которые способны вносить существенный вклад в развитие нефропатии как у больных СКВ ваупог е1 а Сучков и др. Цель исследования выяснить возможность участия аутоантител к нативной и денатурированной ДНК в развитии геморрагической лихорадки с почечным синдромом. М ААТ к ДНК методом аффинной хроматографии на ДНКсорбентах и определить их удельную ДНКсвязывающую активность. В работе впервые исследованы ААТ к ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и дана их характеристика. Во всех исследованных образцах сыворотки крови больных ГЛПС, в отличие от здоровых лиц, выявлена ДНКабзимная активность, характерная для цитотоксических ААТ к ДНК. Обнаружено, что уровень содержания ААТ к дДНК в сыворотке крови больных ГЛПС достоверно превышает уровень их содержания в сыворотке крови здоровых лиц. Установлен ранее неизвестный факт присутствия ААТ к ДНК в ЦИК в сыворотке крови больных ГЛПС. Обнаруженное в работе достоверное повышение уровня содержания ААТ к дДНК в сыворотке крови больных ГЛПС по сравнению с уровнем их содержания у здоровых лиц может иметь важное клиникодиагностическое значение. ПрисутствиеААТ к ДНК в составе ЦИК у больных ГЛПС указывает на то, что эти аутоантитела вовлечены в патогенез заболевания, что необходимо учитывать при выборе стратегии иммунокоррекции при ГЛПС. Выявленные существенные различия уровня содержания и свойств ААТ к ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц, свидетельствуют о потенциальной возможности участия ААТ к ДНК в развитии заболевания. Казань, 9ой Международной Пущинской школеконференции молодых ученых Биология наука XXI века. Пущино, ой Международной Пущинской школе конференции молодых ученых Биология наука XXI века. X всероссийском научном форуме Дни иммунологии. СанктПетербург, а также на ежегодных итоговых научных конференциях Казанского государственного университета в гг. По материалам диссертации опубликовано 6 работ.