Исследование гетерофаговой функции клеток печени крыс на модели неспецифического адсорбционного эндоцитоза белка

• Автор: Пупышев, Александр Борисович
• Шифр специальности: 03.00.04, 14.00.16
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 196 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биохимическая классификация типов эндоцитоза. Характеристика неспецифического адсорбционного эндоцитоза.

1.2. Внутриклеточный транспорт эндоцитированннх субстратов в лизосомы

1.3. Характеристика катаболической функции гетеролизосом.

1.4. Механизмы модификации гетерофаговой функции клетки

Обоснование цели, задач и методов исследования.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Субстраты эндоцитоза и процедуры их введения животным

2.2. Препаративные процедуры

2.3. Методы определения активности ферментов . .
2.4. Радиоизотопные методы исследования
2.5. Прочие методы исследования .
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Характеристика адсорбционного эндоцитоза альбумина, обработанного формальдегидом,
в печени крыс
3.2. Исследование эндогенного расщепления денатурированного альбумина в гетеролизосомах
печени крыс.
3.3. Сравнительная характеристика катаболических и физикохимических свойств различных субпопуляций лизосом печени крыс
3.4. Исследование реакции лизосомального аппарата клеток печени на подавление катаболической функции лизосом сурамином .
Заключение
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Если жидкостный пиноцитоз свойственен практически всем изученным в этом отношении клеткам организма, то способностью к неспецифическому адсорбционному эндоцитозу обладают прежде всего клетки, находящиеся в контакте с кровью и другими биологическими жидкостями, такие как полиморфноядерные лейкоциты, моноциты крови, тканевые макрофаги селезенки, печени, легких, костного мозга, лимфатических узлов, эндотелиальные клетки синусоидов, почечных канальцев, трофобласты желточного мешка. Доказательства существования в плазматической мембране участков неспецифического связывания субстратов, то есть не опосредованного узкоспецифическими поверхностными рецепторами, достаточно многочисленны, поскольку адсорбция и эндоцитоз большой и весьма разнородной группы субстратов обнаруживается в отсутствие какихлибо опсонинов ivi , , , i , i , . В неспецифическом связывании субстратов с клеточной мембраной Сильверштейн и соавт. ivi . Неспецифическое связывание водорастворимых субстратов, предшествующее их интернализации, находится в стадии интенсивного изучения. На клетках саркомы0 показано, что активному поглощению подвергаются катионные субстраты аргининбогатый гистон и полиьорнитин, при этом эффект значительно превышает регистрируемую стимуляцию жидкостного пиноцитоза. БуБег , . . При экспериментальном введении в кровоток положительно заряженные белки быстро удаляются из циркуляции, в основном, за счет клеток печени и почек. Период полувыведения из крови крысы для панкреатической РНКазы 9,5 составляет менее 5 минут, лизоцима ,1 менее минут, катионизированного трипсиногена 8,3 не более 5 минут, митохондриальной малатдегидрогеназы 9,3 7 минут, катионного изофермента М4 лактатдегидрогеназы минут i . i . i . , . Нейтральные или анионные формы этих же ферментов выводятся с гораздо более низкой скоростью. Нацример, период полувыведения анионного трипсиногена р1 5,0 равен минутам, анионного изофермента Н4 лантатдегидрогеназы 8 часам i . i . Низкомолекулярные основные белки молекулярная масса менее кДа эндоцитируются преимущественно почкой , , а более полимерные малатдегидрогеназа, лактатдегидрогеназа М4 активно захватываются печенью. Нативные сывороточные белки альбумин, фибриноген и др. i , , , , . . i , i . Общность поверхностных участков связывания для различных положительно заряженных белков подтверждается экспериментами по выявлению конкуренции. Так, удаление из крови лактатдегидрогеназы М4 конкурентно подавляется введением ыалатдегидрогеназы i . Аналогичные взаимоотношения найдены для катионизированных пероксидазы хрена и ферритина , , , катионизированного ферритина и полиьлизина , , . Неспецифический адсорбционный пиноцитоз ряда белковых субстратов подробно изучен в лаборатории Ллойда, использующей в качестве объекта исследования культивируемый желточный мешок крысы. Круг субстратов, активно поглощаемых желточным мешком, близок к таковому для печени , , . Обнаружено, что неспецифическое связывание с плазматической мембраной клеток желточного мешка характерно для изоферментов М4 и Н4 лактатдегидрогеназы, денатурированного альбумина, панкреатической РНКазы. Найденные значения константы диссоциации в бессывороточной среде при 4С составляли для бычьего сывороточного альбумина 3 мкМ, альбумина, обработанного формальдегидом 1, мкМ, лантатдегидрогеназы Н4 0, мкМ, изофермента М4 0, мкМ i, ii , i . Методом конкурентного анализа обнаружено, что катионные субстраты РНКаза, кальцитонин и лизоцим, с одной стороны, и альбумин, обработанный формальдегидом, с другой, имеют различные участки связывания в плазматической мембране клеток желточного мешка крысы i , ii , Iv , ii, .