Анализ генов, специфически экспрессирующихся в клетках плоскоклеточного рака легкого человека

• Автор: Слижикова, Дарья Константиновна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил.

1.1 ВВЕДЕНИЕ

1.2. Рлк ЛЕГКОГО

1.2.1. Патогенез рака легкого человека.

1.2.2. Этиология.

1.2.3. Классификация РЛР

1.2.4. Гистояогическая гетерогенностьЧ

1.2.5. Стадии рака легкого

1.2.6. Прогноз

1.3. Наследуемые особенности генома как факторы риска развития рака.

1.4. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ ПРИ НМРЛ.

1.4.1. Генетическая нестабильность

1.4.1.1. Микросателяитная нестабильность
1.4.1.2. Деацетичирование гистоное
1.4.1.3. Амплификация онкогенов.
1.4.1.4. Метилирование
1.4.1.5. Потеря гетерозиготности
1.4.1.6. Мутации
1.5. Методы изучения транскрипции генов при рл.
1.6. Изучение изменения уровня белков при РЛ.
1.7. транскрипция генов в НМРЛ.
1.7.1.Онкогены и опухолевые супрессоры
1.7.2. Гены, участвующие в регуляции клеточного цикла и сигнальной трансдукции
1.7.3. Гены, кодирующие белки, вовлеченные в апоптоз
1.7.4.1 ены. кодирующие белки участвующие в репликации и репарации ДНК
1.7.5. Гены, кодирующие метаболические белки, белки переносчики, белки ионных каналов.
1.7.6. Гены белков, участвующих в клеточной адгезии и формировании структуры клетки, опухолевые антигены
1.7.7. Гены, кодирующие ядерные белки.
1.7.8. Гены белков, участвующих в опухолевой инвазии, ангиогенезе.
1.7.9. Гены, кодирующие другие белки
Заключение.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. ОБОРУДОВАНИЕ
2.2. Реактивы и ферменты.
2.3. СРЕДЫ, БУФЕРЫ, РАСТВОРЫ.
2.4. Ткани и клеточные линии.
2.5. Штаммы, культуры, плазмиды
2.6. ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ ДЛЯ ПЦР
2.7. МЕТОДЫ
2.7.1 .Выделение РНК
2.7.2. Синтез первых цепей кДНК на матрице мРНК.
2.7.2.1. Денатурация РНК, отжиг праймеров, построение цепи кДНК.
2.7.2.2. Контроль па наличие примесей ДНК. КТ контроль.
2.7.3. Вычитающая гибридизация кДНК.
2.7.4. Дифференциальная гибридизация
2.7.4.1. Приготовление мембран для гибридизации.
2.7.4.2. Синтез зонда для гибридизации
2.7.5.Определение первичной структуры ДНК.
2.7.6. ОТПЦР.
2.7.7. Клонирование кДНК ЮЭ.
2.7.8. Получение антисыворотки к Л7У
2.7.9. Получение белковых экстрактов
2.7 Анализ белков.
2.7.4. Программное обеспечение
2.7 Статистический анализ.
БЛАГОДАРНОСТИ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Вычитающая гибридизация кДНК из нормальных и опухолевых тканей ПЛОСКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ЛЕГКОГО ЧЕЛОВЕКА.
3.1.1. Выделение и характеристика смесей мРНК из нормальных и опухолевых тканей легкого человека
3.1.2. Вычитающая гибридизация. Отбор дифференциальных клонов.
3.1.3. Дифференциальная гибридизация. Отбор и идентификация дифференциальных транскриптов
3.2. Анализ нуклеотидных последовательностей ДНК дифференциальных клонов.
3.3. Анализ дифференциальной экспрессии огобранных генов.
3.4. Изучение транскрипционной активности генов РРБЗА, ЫОЫ2, ИРИО, , ЯРПОА, ЮоС и ЯРТРС в клеточных линиях и тканях человека.
3.5. Анализ гена ЮЗ
3.5.1. Выявление уровня 1 в опухолевых и нормальных тканях с помощью тканевого микрочипа
3.6. Анализ генов белков легочного сурфактанта.
3.6.1.Анализ транскрипции генов белков сурфактанта в нормальных тканях пациентов
3.6.2. Анапа транскрипции генов белков сурфактанта в опухолевых тканях ПРЛ по сравнению с нормальными тканями.
3.7. Регуляция экспрессии генов белков сурфактанта.
выводы
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Например, гефитиниб и эрлотиниб, ингибиторы тирозинкиназы дают положительный эффект приблизительно в запущенных случаев НМРЛ . Патогенез рака легкого человека. Опухолевому процессу свойственны следующие этапы образование раковой клетки с измененным генотипом и потенциалом к неконтролируемому росту приобретение трансформированной клеткойклетками автономности, атипии, структурной и функциональной анаплазии прогрессия бурный рост опухоли с образованием опухолевого узла и склонностью к метастазированию . От раковой трансформации исходной клетки до образования опухоли, диагностируемой с помощью рентгена, при раке легкого проходит больше десятка лет . Начальным этапом морфогенеза центрального рака легкого является повреждение бронхиального эпителия. В этих условиях канцерогенные вещества могут свободно контактировать, накапливаться и повреждать базальные клетки, вызывая их пролиферацию. Продолжающееся действие канцерогенного агента может приводить к нарушению клеточной дифференцировки в очагах повреждения и к пролиферации базальных клеток, что вызывает развитие плоскоклеточной метаплазии. Эпителий в очагах плоскоклеточной метаплазии облачает повышенной чувствительностью к канцерогенным воздействиям и быстрее может подвергаться трансформации . Следующим этапом морфогенеза является дисплазия эпителия, развивающаяся в бронхах в очагах плоскоклеточной метаплазии. В очагах дисплазии эпителия крупных бронхов обнаруживаются клетки различной формы цилиндрические, базальные, промежуточные, нейроэндокринные, которые сохраняют митотическую активность и способны подвергаться злокачественной трансформации . По достижении определенных размеров опухоль приобретает способность к метастазированию, которое происходит лимфогенным регионарным и гематогенным путем. Вначале, как правило, происходит лимфогенное метастазирование с поражением внутригрудных лимфатических узлов. При попадании опухолевых клеток в кровяное русло организма происходит гематогенное метастазирование с поражением отдаленных органов и тканей. Рак максимально связан с бытовыми привычками, факторами окружающей среды, стилем жизни и условиями производства. Основным фактором риска развития рака легкого является курение . С курением связывают более смертей от этой болезни . Риск развития РЛ у курящих людей выше более чем в раз, чем у некурящих , . Курение приводит к развитию аномальных явлений в эпителии продукции цитокинов, хемокинов и ростовых факторов, которые могт вызывать дисфункцию эпителия и злокачественную прогрессию . Этиология плоскоклеточного рака напрямую связана с курением, в то время как для аденокарцином такая связь не выявлена . Считают, что возникновение РЛ среди некурящих, которые составляют до страдающих от рака легкого, происходит в результате комбинированного воздействия нескольких факторов. Второй по значению после курения фактор риска контакт с радиоактивным газом радоном, возникающим при распаде 1а . При распаде радона возникает излучение, повреждающее ДНК и повышающее тем самым риск злокачественной трансформации клеток. Еще один канцероген это асбест неорганический материал, образующий мелкие летучие частицы. Наибольшую опасность он представляет для курильщиков. Контактом с асбестом объясняют случаев РЛ . Кроме того, факторами риска РЛ являются хроническое воспаление, пневмосклероз после туберкулеза, наследственная предрасположенность, а также контакт с такими канцерогенами, как дихлордиметиловый эфир, полициклические ароматические углеводороды, соли хрома и никеля, органические соединения мышьяка , и пассивного курения , . Известно, что вирусы вызывают РЛ у животных ,. Некоторые данные позволяют предположить, что такие вирусы, как папилломавирус , вирус . С , вирус 8Ч0, вирус ВК и цитомегаловирус , вызывают РЛ у человека. Эти вирусы могут влиять на клеточный цикл и ингибировать апоптоз, вызывая неконтролируемое клеточное деление. В этиологии центрального рака имеет значение вдыхание канцерогенных веществ, а периферического проникновение канцерогенов с крово и лимфотоком, что подтверждается экспериментальными и клиническими данными .