Иммунохимическое изучение бактериродопсина с помощью моноклональных антител

• Автор: Втюрина, Ирина Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 118 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Антигенная структура белков и способы

ее изучения

1.2. Моноклональные антитела как инструмент

для изучения антигенной структуры белков

1.3. Бактериородопсин уникальная модель для изучения антигенной структуры и топограг

фии мембранных белков

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Получение и характеристика моноклональных антител
3.2. Изучение антигенной структуры бактериородопсина с помощью моноклональных антител
3.3. Топография бактериородшсина в мембране, выявленная с помощью моноклональных антител
3.4. Заключительное обсуждение
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Участок молекулы, непосредственно взаимодействующий со связывающим центром антитела, называется антигенной детепминантой. Большинство исследований по изучению антигенных детерминант проводили по сходному экспериментальному протоколу, в соответствии с которым антитела, полученные к интактным белковым структурам, исследовали на взаимодействие с денатурированной иили фрашентированной молекулой ,7. Тот факт, что антитела, полученные к нативному белку, часто не взаимодействуют с его денатурированной формой, а также то, что специфические антитела, полученные к пептидам, могут взаимодействовать с нативным белком, привели к заключению, что существуют два класса антигенных детерминант конйошадионные и линейные ,. Конформационные детерминанты определяют как детерминанты, зависящие от нативной пространственной конформации белка они состоят из аминокислотных остатков, которые не расположены последовательно в полипептидной цепи, но благодаря укладке белка пространственно сближены. В отличие от них, линейные детерминанты зависят исключительно от аминокислотной последовательности соответствующего пептидного сегмента и состоят из 58 аминокислотных остатков ,. Постоянство размера линейных детерминант в различных белках отражает постоянный размер комплементарных антигенсвязывающих центров антител. Существование двух ввдов детерминант не подразумевает наличия различных антигенсвязыванвдих механизмов. Показано, что большой мольный избыток линейного пептида ингибирует взаимодействие антитела и соответствующей конформационной детерминанты ,7. Это объясняется тем, что пептиды существуют в растворе в виде набора различных конформеров и с антителом связываются только те немногочисленные конформеры, которые близки нативному белку. Из сказанного следует, что все детерминанты являются конформационными в том смысле, что связывавший участок антитела обладает высоким сродством только к той популяции конформеров антигена, которая ему комплементарна. Вследствие этого в последнее время шесто понятий линейные и конфорлационные детерминанты вводят понятие топографические детерминанты , имея в виду, что антигенные детерминанты образованы структурами на поверхности белка. Топографическая детерминанта может либо содержаться внутри единственного сегмента аминокислотной последовательности, при этом она может и не включать все аминокислотные остатки этого сешента так называемая простая топографическая детешинанта, либо образовываться аминокислотными остатками, линейно удаленными друг от друга на полипептидной цепи, но соседствующими на поверхности белка благодаря его упаковке комплексная топографическая детерминанта. При изучении антигенной структуры белка необходимо определить структуру его антигенных детерминант. В последние годы для изучения антигенной структуры белков широко используются два других подхода использование антител к синтетическим пептидам , и к белкам, модифицированным с помощью реакций направленного мутагенеза II Для более детального выяснения структуры антиген детерминанты необходимо изучение комплекса антигенная детерминанта антигенсвязывавдий центр антитела методами рентгеноструктурного анализа. А, исследования таких иммунных комплексов только начинаются. А. Данное исследование показало, что связывающий участок антитела это не просто полость, образованная гипервариабельннми участками вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей, а значительно большая область за ее пределами. Соответственно, значительно большая часть антигена участвует во взаимодействии с антителом, что согласуется с понятием о комплексной топографической детерминанте. Следует ожидать, что продолжение этих перспективных исследований приведет к более детальному пониманию структуры антигенных детерминант. Учитывая то, что количество всевозможных антител и антигенов является астрономическим, а проведение такого исследования чрезвычайно трудоемко, можно констатировать, что тонкая структура подавляющего большинства антигенных детерминант и антигенсвязывающих участков так и останется неустановленной