Регуляция биосинтеза лимфотоксинов α и β в клетках периферической крови и в перевиваемых культурах Т-лимфоцитов человека

• Автор: Бойченко, Вероника Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

РЕГУЛЯЦИЯ БИОСИНТЕЗА ЛИМФОТОКСИНОВ.

1.1. Биосинтез растворимого и мембраносвязанного лимфотоксинов при активации лимфоцитов и природных киллеров
1.2. Факторы транскрипции, участвующие в регуляции синтеза лимфотоксинов в покоящихся и активированных лимфоцитах.
1.3. Иммуносупрессанг регулятор внутри клеточной передачи сигнала и экспрессии генов в лимфоцитах.

1.4. Генетическая инактивация лимфотоксинов или их рецепторов приводит к нарушению

структуры и функции вторичных лимфоидных тканей

Заключение.

ГЛАВА II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Использованные материалы
2.2. Использованные методы.
ГЛАВА I. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Уровни базальной экспрессии и в клетках периферической крови различны.
3.2. ингибирует активацию транскрипции в клетках периферической крови
3.3. Комбинация РМА с иономицином подавляет конститутивную экспрессию в клетках периферической крови.
3.4. Экспрессия мРНК ЬТа и ЬТр в субпопуляциях клеток периферической крови.
3.5. В перевиваемых культурах Тлимфоцитов МОЬТ4 и .игка транскрипция ЬТр и ЬТа является активируемой и блокируется СзА
3.6. Альтернативный сплайсинг ЬТР
3.7. Получение и характеристика антител к лимфотоксинам человека и мыши
3.8. СбА ингибирует индуцированную экспрессию белка ЬТа но не влияет на синтез белка ЬТр в клетках периферической крови человека
3.9. СэА ингибирует индуцированный синтез белка ЬТа, но не влияег на синтез белка ЬТр вТлимфомной линии МОЬТ4.
3 СэА не влияет на связывание ЖкВ с энхансерами генов Ыа и ЬТр в клетках периферической крови человека и Тлимфомных линиях клеток
БЛАГОДАРНОСТИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


. В отличие от остальных цитокинов семейства , которые представляют собой трансмембранные гдикопротсины II типа а не имеет трансмембранног о домена. i , и минорного, 2 i . i . i . Недавно было показано, что растворимый гомотример взаимодействует также с рецептором V i . Взаимодействие лигандов, образуемых продуктами генов лимфотоксинов, с различными рецепторами семействасхематически представлено на Рис. I. Основным источником лимфотоксинов являются Г, В лимфоциты и природные киллеры , . 3 , I 2 Рис. . Структура локуса человека. В. Взаимодействие некоторых лигандов и рецепторов семейства . В литературе описаны результаты опытов i vi по регуляции промоторов обоих генов а. , . Показано, что форболовыс эфиры активируют экспрессию поверхностного и секретируемого лимфотоксина в перевиваемых клеточных линиях и первичных клетках человека и мыши, что предполагает участие в активации экспрессии лимфотоксинов РКС i . i , . . i . i . i . . i , . Экспрессия лимфотоксинов активируется в лимфоцитах и клетках вместе с другими цитокинами раннего иммунного ответа, такими, как I2, уинтерферон, что свидетельствует об их важной роли в регуляции иммунных процессов организма человека и мыши. Одним из подходов к изучению регуляции биосинтеза цитокинов в лимфоцитах представляется применение форболовых эфиров совместно с кальциевыми ионофорами для активации клеток. Такая активация имитирует взаимодействие комплекса Т или Вклеточного рецептора лимфоцитов с антигеном, представленным в комплексе с МНС антигенпрезентирующими клетками. Данная работа представляет собой использование такой системы в изучении биосинтеза лимфотоксинов. и 3 при активации форболовым эфиром совместно с кальциевым иоиофором, либо антителами к 3 совместно с антителами к , образуют основной 2i и минорный i2 гетеротр и мерные комплексы на поверхности лимфоцитов и клеток человека, а также секретируют 3 i . i . Тлимфоцитов, а также влияние иммуносупрессанта СА на биосинтез белков ЬТсх и ЬТр. Работа была выполнена в годах в Лаборатории молекулярной иммунологии Института молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАИ и в Лаборатории молекулярной иммунологии Института физикохимической биологии им. Л.Н. Белозерского МГУ часть экспериментов была выполнена в Отделе молекулярной биологии Института биологии клетки Университета г. Тюбинген, Германия. Финансирование осуществлялось в рамках Российской государственной программы Геном человека и гранта фонда Фольксваген, Германия. ГЛАВА I. РЕГУЛЯЦИЯ БИОСИНТЕЗА ЛИМФОТОКСИНОВ МЫШИ И ЧЕЛОВЕКА. Стимулирование Тлимфоцитов путем взаимодействия 3 с антигеном в комплексе с молекулами класса II главного комплекса гистосовместимости на антигенпрезентирующих клетках либо, в модели i vi, кросссшивка 3 антиСОЗ антителами инициирует параллельные каскады киназ, которые ведут к активации фосфолипазы С. Далее следует превращение инозитольных липидов в имозитолтрифосфаты, которые, в свою очередь, вызывают как высвобождение Са из внутриклеточных хранилищ, так и образование диацилглицеридов. I кальциевый активируются кальмодулинзависимые ферменты кальцинейрин и кальмодулинзависимые киназы СаМ киназы и 2 протеинкиназиый активируется протеинкиназа С РКС, которая i viv активируется диацилглицеридом. Дополнительно, серией связывающих белков, активируется киназный каскад . Используя ингибитор элонгации транскрипции актиномицин Д и анализ i и соавт. РМА и конканавалином А транскрипция в лимфоцитах происходит в 8 раз менее интенсивно, чем транскрипция и не зависит от синтеза белка v i .