Получение рекомбинантных нуклеокапсидных белков вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) и их применение в качестве специфических компонентов диагностической тест-системы для определения антител к вирусу РРСС

• Автор: Алексеев, Константин Петрович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 120 с. : ил.

До последнего времени не существовало полных данных по распространенности этого заболевания на территории нашей страны. В России до недавнего времени отсутствовали средства для диагностики и эпизоотического мониторинга РРСС, разработка которых в условиях экспансии вируса по территории нашей страны представляется крайне актуальной. Серологические методы исследования представляются наиболее удобными для контроля за распространением вируса, так как персистенция вируса может протекать бессимтомно, РНК вируса в сыворотке крови не всегда обнаруживается, но присутствуют антитела к вирусу РРСС. В этих условиях крайне важной задачей была разработка отечественной тестсистемы на основе ИФА для определения антител к вирусу РРСС. Культивирование вируса сопряжено с рядом сложностей. Многие изоляты размножаются только в первичной культуре альвеолярных макрофагов, изоляты европейского типа накапливаются в низких титрах. Не все первичные культуры альвеолярных макрофагов оказываются чувствительными к вирусу. Таким образом, затруднено получение вирусных антигенов, которые можно было бы использовать в качестве специфических компонентов диагностических тестсистем на основе иммуноферментного анализа. В этих условиях актуальной задачей является получение рекомбинантных антигенов для использования в качестве компонентов тестсистемы на основе метода иммуноферментного анализа ИФА. В нашей работе была поставлена задача получения рекомбинантного нуклеокапсидного белка вируса РРСС и разработки на его основе тестсистемы для определения антител к вирусу РРСС. Цель и задачи исследования. Целью данной работы была разработка технологии получения рекомбинантных нуклеокапсидных антигенов вируса РРСС и создание на их основе иммуноферментной тестсистемы для выявления антител к вирусу репродуктивнореспираторного синдрома свиней в сыворотке крови животных. Провести предварительные исследования распространенности вируса РРСС на территории России и Белоруссии. Разработать технологию и получить рекомбинантные нуклеокапсидные белки вируса РРСС американского и европейского типов. Методом непрямого твердофазного ИФА сравнить между собой антигенную активность полученных рекомбинантных продуктов с использованием сывороток крови, полученных от иммунных и неиммунных животных. ЮЕХХ, США. Разработать на основе полученных и охарактеризованных рекомбинантных антигенов иммуноферментную тестсистему для выявления антител к вирусу РРСС. Определить диагностическую ценность разработанной тестсистемы с использованием панели референтных положительных и отрицательных сывороток крови. Внедрить разработанную тестсистему в ветеринарную практику. III. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Репродуктивнореспираторный синдром свиней. Репродуктивнореспираторный синдром свиней это вирусное заболевание, характеризующееся наличием репродуктивных проблем у взрослых свиней и респираторными нарушениями у поросят. Репродуктивные нарушения проявляются в возникновении большого количества абортов, преждевременных опоросов, рождении мертвых и ослабленных поросят, последние часто погибают вскоре после рождения с признаками острого респираторного заболевания, осложненного вторичными бактериальными и вирусными инфекциями i . Для характерны подострое протекание инфекции у взрослых животных и широкое разнообразие клинических проявлений, таких как отсутствие аппетита, агалактия, лихорадка, геморрагическое окрашивание кожи ушей, живота и половых органов, снижение качества спермы и потенции у хряков , . Системные признаки включают летаргию, ярко выраженные лихорадку, агалактию и анорексию, особенно во время острой фазы инфекции . Респираторные признаки представлены затрудннным дыханием и кашлем. Геморрагическое окрашивание и депигментация могут быть чрезвычайно кратковременными, длящимися всего несколько минут, обычно они появляются на день после первых клинических проявлений инфекции. Нарушения репродуктивной функции длятся месяцев в течение всего репродуктивного цикла стада. Рядом исследователей были также описаны бесплодие и нарушения полового цикла свиноматок . Для характерны широкие пределы изменчивости клинических признаков.