Структурные и функциональные особенности рибосом-инактивирующих белков растения Ricinus communis

• Автор: Савочкина, Юлия Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 с.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

Введение. .

Глава 1. Обзор литературных данных

1.1 Токсины растения ii i рицин и агглютинин рицина

представители рибосоминактивирующих белков II типа.

1.1.1 Строение и ферментативная активность Асубъединицы рицина. .

1.1.2 Строение и углеводсвязывающая активность Всубъединицы рицина.

1.1.3 Тетрамерный токсин агглютинин рицина и рицин родственые белки растения ii i.

1.2 Особенности внутриклеточного транспорта

рибосоминактивирующих белков II типа. Роль струюурных особенностей данных белков при транспорте внутри клетки.
1.2.1 Интернализация токсинов.
1.2.2 Транспорт в эндосомальном компартменте.
1.2.3 Транспорт в аппарат Гольджи.
1.2.4 Ретроградный транспорт в эндоплазматический ретикулум.
1.2.5 Транслокация токсина.
1.3 Современные подходы к изучению структуры рибосом
инактивирующих белков. Использование спектроскопических
методов для изучения структуры белков в растворе.
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1 Выделение и очистка рицина, агглютинина рицина и их
изолированных субъединиц.
2.2 Твердофазный иммуноферментный анализ
2.3 Определение ферментативной активности токсинов в бесклеточной системе синтеза белка.
2.4 Определение цитотоксической активности белков.
2.5 Измерения спектров комбинационного рассеяния токсинов.
2.6 Кристаллизация агглютинина рицина в комплексе с рБгалактозой.
2.7 1 остроение модели структуры молекулы агглютинина рицина методом молекулярног о замещения.
Глава 3. Результаты и их обсуждение.
3.1 Изучение структуры рицина и агглютинина рицина в водном растворе с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния.
3.2 Сравнение иммунохимических свойств Асубъсдиниц рицина агглютинина рицина.
3.3 Сравнение ферментативной активности Асубъединиц рицина агглю тинина рицина в бесклеточной системе синтеза белка
3.4 Изучение отдельных этапов внутриклеточного транспорта рицина с помощью гибридом
3.5 Изучение структуры агглютинина рицина в комплексе
с рП галактозой методом рентгеноструктурного анализа.
Список литературы


Введение. Глава 1. II типа. Строение и ферментативная активность Асубъединицы рицина. Строение и углеводсвязывающая активность Всубъединицы рицина. Тетрамерный токсин агглютинин рицина и рицин родственые белки растения ii i. II типа. Роль струюурных особенностей данных белков при транспорте внутри клетки. Интернализация токсинов. Транспорт в эндосомальном компартменте. Транспорт в аппарат Гольджи. Ретроградный транспорт в эндоплазматический ретикулум. Транслокация токсина. Глава 2. Определение ферментативной активности токсинов в бесклеточной системе синтеза белка. Определение цитотоксической активности белков. Измерения спектров комбинационного рассеяния токсинов. Кристаллизация агглютинина рицина в комплексе с рБгалактозой. Глава 3. Результаты и их обсуждение. Изучение структуры рицина и агглютинина рицина в водном растворе с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния. Сравнение иммунохимических свойств Асубъсдиниц рицина агглютинина рицина. П галактозой методом рентгеноструктурного анализа. А.о. Рибосоминактивирующие белки II типа являются удобными модельными объектами для изучения механизма внутриклеточного транспорта белков. Данные белки обладают высокой токсичностью для эукариотических клеток, благодаря чему они находят важное практическое применение для получения на их основе фармакологических препаратов иммунотоксинов. Группа растительных рибосоминактивирующих белков II типа РИБ2 включает более различных белков, обладающих высокой степенью гомологии и сходной пространственной структурой, образованной А и субъединицами, соединенными дисульфидной связью. Каталитически активные Асубъединицы обладают гликозидазной активностью в отношении рибосомальной РНК эукариотических клеток. В результате данной активности происходит остановка синтеза белка и гибель клетки. Аминокислотные остатки, входящие в каталитический центр Асубъединиц, являются абсолютно консервативными среди данного семейства. Строение углеводсвязывающих центров Всубъединиц также во многом сходно. Однако, эффективность цитотоксического действия различных белков этого класса существенно различается. Мео отличается в 0 раз. Сходные результаты получены и на других клеточных линиях. Сравнительный анализ структурных и функциональных свойств родственных рибосоминактивирующих белков один из эффективных подходов к выяснению механизмов, определяющих различия в их биологической активности. Понимание структурных особенностей, влияющих на цитотоксическую активность данных белков необходимо также для получения эффективных препаратов иммунотоксинов на их основе. Целью данной работы является изучение структуры тетрамерно го рибосоминактивирующего белка агглютинина рицина и выявление структурных особенностей, влияющих на биологическую активность данного белка. Изучение структуры рицина и агглютинина рицина в водном растворе методом спектроскопии комбинационного рассеяния. Сравнение ферментативной активности Асубъединиц рицина и агглютинина рицина в бесклеточной системе синтеза белка. Сравнение иммунохимичсских свойств Асубъединиц рицина и агглютинина рицина. Изучение внутриклеточного транспорта рицина с помощью гибридом, продуцирующих антитела к его Асубъединице. Получение кристаллов агглютинина рицина в комплексе с галактозой и изучение структуры агглютинина рицина методом рентгеноструктурного анализа.